[发明专利]一种快速测定面团中游离巯基和二硫键含量的方法

权利要求书

1.一种快速测定面团中游离巯基和二硫键含量的方法，其特征在于，所 述方法包括以下步骤：

a、绘制L-半胱氨酸标准曲线：用0.2MTris-Gly缓冲溶液将L-半胱氨酸 配制成不同浓度的标准溶液，测定不同浓度的L-半胱氨酸在412nm处的吸光 度，以吸光度值为横坐标，对应的L-半胱氨酸标准溶液浓度为纵坐标，绘制 L-半胱氨酸标准曲线。

b、测定面团中游离巯基含量：取新鲜小麦粉面团，研磨后溶解于0.2M Tris-Gly缓冲溶液中，离心得到上清液；上清液显色后于波长412nm处测定 吸光度；通过L-半胱氨酸工作曲线计算得到面团中游离巯基的含量。

c、测定面团中二硫键含量：取步骤b中上清液，加入β-巯基乙醇和缓冲 液溶液，然后加入12％三氯乙酸溶液，离心得到蛋白质沉淀；用12％三氯乙 酸洗沉淀两次，然后将沉淀物溶于缓冲溶液中，混和均匀显色后测定吸光度； 以L-半胱氨酸标准曲线校准，得到总巯基的含量。通过L-半胱氨酸工作曲线 计算得到面团中总巯基和二硫键含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按照如下步骤绘制-半胱 氨酸标准曲线：用0.2MTris-Gly缓冲溶液将L-半胱氨酸配制成2mmol/L的标 准溶液，并稀释为浓度为0、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06mmol/L的标准液； 以蒸馏水溶液为空白，分别别取4mL稀释后的不同浓度标准液加入 10mmol/LDTNB0.1mL，室温下显色20min，412nm测定吸光度值；以吸光 度值为横坐标，对应的，L-半胱氨酸标准溶液浓度为纵坐标，绘制标准曲线， 并进行线性回归，求出回归方程。

3.根据上述权利要求所述的方法，其特征在于，按照如下步骤测定面团 中游离巯基含量：取500mg(以干粉重计)新鲜小麦粉面团，用研钵研磨， 溶解于10mL的0.2MTris-Gly缓冲溶液中，4000r/min离心15min，得到上 清液；取4ml上清液，加入10mmol/L的DTNB溶液0.1mL，混和均匀，显 色20min后，于波长412nm处测定吸光度；通过L-半胱氨酸工作曲线计算得 到面条中游离巯基的含量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述面团按照以下重量份 混合组成：小麦粉100份，蒸馏水30-50份；面团重量2-6份，缓冲溶液100 份。

5.根据上述权利要求所述的方法，其特征在于，按照如下步骤测定面团 中二硫键含量：取步骤b中上清液1mL，加入0.1mLβ-巯基乙醇和4mL缓冲 液溶液，混合液在25℃下保温1h，然后加入10mL12％三氯乙酸溶液，混合 液25℃下保温1h后，4500r/min离心15min；用5mL12％三氯乙酸洗沉淀两 次，然后将沉淀物溶于10mL缓冲溶液中，然后加入0.1mL10mmol/L的DTNB， 混和均匀显色20min后，于波长412nm处测定吸光度；以L-半胱氨酸标准曲 线校准，得到总巯基的含量；通过L-半胱氨酸工作曲线计算得到面条中总巯 基和二硫键含量。

6.根据上述权利要求所述的方法，其特征在于，所述Tris-Gly缓冲溶液， 其规格为：pH8.0，8M尿素，1％SDS，3mMEDTA。

7.根据上述权利要求所述的方法，其特征在于，所述小麦粉指标符合中 华人民共和国国家标准GB/T1355-1986，并随国家标准更新而变化。