[发明专利]一种制备狂犬病活载体疫苗的方法及其产品和用途

摘要

本发明公开了一种制备狂犬病活载体疫苗的方法及其产品和用途。所述方法包括如下步骤一、设计引物，扩增出狂犬病病毒抗原蛋白G基因与细菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因；二、将抗原蛋白G基因与FIjB或FIiC基因插入到复制缺陷型腺病毒穿梭载体特异性启动子和终止子之间，构建成含有基因G-FIjB或G-FIiC的腺病毒穿梭载体；三、将获得的重组复制缺陷型腺病毒穿梭载体与腺病毒骨架载体通过同源重组得到重组腺病毒质粒；四、用重组腺病毒质粒产生基因组结构均一的重组腺病毒。此外，本发明还提出了有上述方法制备得到的狂犬病活载体疫苗。相较于现有技术，本发明制备得到的活载体疫苗更为安全和有效，且制作周期较短，在狂犬病的预防或治疗领域将具有良好的应用前景。

主权项

一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒G蛋白和细菌鞭毛蛋白制备狂犬病活载体疫苗的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)制备目的基因：设计引物，通过PCR的方法扩增出狂犬病病毒(Rabies Virus，RV)的抗原蛋白G基因与细菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因；(2)构建重组复制缺陷型腺病毒穿梭载体：将步骤(1)扩增的到的抗原蛋白G基因与细菌鞭毛蛋白FIjB或FIiC基因一同插入到复制缺陷型腺病毒穿梭载体特异性启动子和终止子之间，检测抗原蛋白G基因以及FIjB或FIiC基因是否已经整合到腺病毒穿梭载体中，构建得到含有G‑FIjB或G‑FIiC的重组复制缺陷型腺病毒穿梭载体，命名为PAdTrack‑CMV/G‑FIjB或PAdTrack‑CMV/G‑FIiC；(3)获得复制缺陷型腺病毒质粒：将获得的重组复制缺陷型腺病毒穿梭载体PAdTrack‑CMV/G‑FIjB或PAdTrack‑CMV/G‑FIiC与腺病毒骨架载体PAdEasy‑1通过在大肠杆菌中进行质粒间同源重组从而得到重组腺病毒质粒；(4)用重组腺病毒质粒产生基因组结构均一的重组腺病毒，包括以下操作：1)用Pac I酶切步骤(3)得到的重组腺病毒质粒，2)转染293细胞，3)接种293细胞，4)获得基因组结构均一的重组腺病毒，收集病毒感染的病变细胞，连同上清冻存，即得。