[发明专利]一种提高类芽孢杆菌产糖量的选育方法及其应用

摘要

本发明提供一种提高类芽孢杆菌产糖量的选育方法及其应用，所述方法为：（1）将类芽孢杆菌出发菌株接种到普通液体培养基中活化；（2）稀释成一定浓度菌悬液；（3）制成菌膜后进行诱变；（4）涂布于普通固体培养基中培养；（5）初步筛选；（6）将初筛菌株接种于普通液体培养基中培养得到产糖量较高的菌株；（7）确定步骤（6）得到的为产糖量较高的类芽孢杆菌菌株；（8）确定产糖量较高菌株的产糖量遗传稳定性。所述选育方法应用于粉煤灰废水、水体中微藻的沉降处理。本发明方法利用等离子体诱变技术对高产微生物絮凝剂的类芽孢杆菌进行诱变育种，有效提高了类芽孢杆菌的絮凝效率和絮凝剂产量，应用于粉煤灰废水、水体中微藻的沉降处理。

主权项

1.一种提高类芽孢杆菌产糖量的选育方法，其特征在于按照以下工艺步骤进行：(1)将类芽孢杆菌出发菌株接种到普通液体培养基中，活化20～32h；(2)将活化的菌液离心，弃去上清液，沉淀菌体用无菌生理盐水稀释成浓度为100000～150000cfu/ml的菌悬液；(3)取步骤(2)的菌悬液15～20uL制成菌膜，利用多功能等离子体诱变系统对其进行诱变；所述诱变过程的条件为：电源功率为300W，工作气流为12L/min，等离子体发射源与样品之间的高度为5mm，工作气体为氮气，照射时间为105～110s；(4)取诱变后的菌体加入无菌生理盐水稀释至1mL，取0.1mL均匀涂布于普通固体培养基中，培养36～48h；(5)根据菌落形态大小，初步筛选出等离子体诱变平板上与出发菌株形态相似、菌落半径较大的初筛菌株；(6)将类芽孢杆菌初筛菌株接种于普通液体培养基中，培养20～32h，得到产糖量较高的类芽孢杆菌菌株；(7)将步骤(6)的菌悬液以1％的接种量转接到发酵液体培养基中，于温度25～30℃，pH 7～8，摇床转速130～160r/min的条件下培养24～72h；离心，分离，保留上清液，利用醇沉‑冷冻干燥法得到的粗多糖即为絮凝剂，称量粗多糖重量，确定步骤(6)得到的为产糖量较高的类芽孢杆菌菌株；所述发酵培养基的化学成分及浓度为：葡萄糖20.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，磷酸氢二钾5.0g/L，七水硫酸镁0.2g/L，氯化钠0.1g/L，脲0.5g/L，酵母膏0.5g/L，蒸馏水1L/L；(8)将步骤(6)的产糖量较高的类芽孢杆菌菌株接种于普通液体培养基中，重复步骤(6)和(7)的过程5～8次，确定其产糖量的遗传稳定性。