[发明专利]一种针对特定大小RNA片段的高通量测序文库构建方法在审
| 申请号： | 201510707080.9 | 申请日： | 2015-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN105200531A | 公开（公告）日： | 2015-12-30 |
| 发明（设计）人： | 郑洪坤;刘慧;郭强;方涛 | 申请（专利权）人： | 北京百迈客生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 101300 北京市顺*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种针对特定大小RNA片段的高通量测序文库构建方法，包括以下步骤：去除总RNA中的DNA；去除总RNA中的rRNA；聚丙烯酰胺凝胶电泳切胶筛选目的大小的RNA；在RNA的3’端连接3’接头；以RNA为模板，加入与3’接头反向互补的逆转录引物进行退火，使3’接头与逆转录引物结合；在RNA的5’端连接5’接头；以RNA为模板，进行逆转录；使用逆转录引物与Index引物进行PCR反应，获得测序文库。上述方法能够去除DNA污染和rRNA对测序数据的影响，同时增加了聚丙烯酰胺凝胶电泳切胶，达到获取特定大小片段的目的。该方法可广泛用于包括原核小RNA在内的特定大小RNA片段的高通量测序。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 针对 特定 大小 rna 片段 通量 序文 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种针对特定大小RNA片段的高通量测序文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)去除总RNA中的DNA；(2)去除总RNA中的rRNA序列；(3)使用聚丙烯酰胺凝胶电泳切胶筛选目的大小的RNA；(4)在目的大小的RNA的3’端连接3’接头；以RNA为模板，加入与3’接头反向互补的逆转录引物进行退火，使3’接头与逆转录引物结合；(5)在RNA的5’端连接5’接头；以RNA为模板，进行逆转录；(6)使用P5引物与Index引物进行PCR反应，获得测序文库。
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