[发明专利]一种利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法

摘要

本发明涉及利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法，可有效解决对铬污染土壤的修复问题，方法是，从化工厂附近土壤中筛选并纯化出芽孢杆菌CP-3，分类命名为芽孢杆菌（Bacillus sp），将芽孢杆菌CP-3制成芽孢杆菌CP-3种子液，接种于发酵培养基中培养发酵，将发酵液与草炭土混匀，风干，得微生物修复菌剂；将微生物修复菌剂均匀撒播于土壤表层，播种苏丹草种子，按植物正常生长要求管理，60天后即可使土壤中的含铬量降低72.9-88.7%，实现对铬污染土壤的修复，本发明高效菌株与苏丹草兼容性好，对污染地的环境适应性强；微生物修复菌剂不仅能改善土壤环境，促进苏丹草对铬的富集，而且增强了微生物施入土壤的可操作性，成本低廉。

主权项

一种利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法，其特征在于，由以下步骤实现：一、耐铬微生物的筛选采集化工厂附近铬污染土样，采用多点随机采样法采集土壤样品混合均匀，去除动植物残体，过筛后装入无菌袋低温保存带回实验室，进行耐铬微生物的分离；将铬污染土壤与灭菌水以重量比1︰9制成混悬液，然后再用混悬液10倍体积的灭菌水进行稀释，涂布于LB固体培养基平板上，28～32℃培养1～2天，挑取单菌落，平板划线法划线于LB固体培养基平板上，37℃恒温培养箱过夜培养，成纯化的单菌落；取纯化的单菌落分别接种到Cr (VI)浓度为100mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L的LB固体培养基平板上，28～32℃培养1～2天，筛选出最强的耐铬菌落，对其单菌落采用平板划线分离法进行纯化，得纯化菌株，经生理生化和16S rDNA测定为芽孢杆菌CP‑3，分类命名为芽孢杆菌（Bacillus sp），并于2014年11月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.9990，地址：北京市朝阳区北辰西路3号；二、制备微生物修复菌剂（1）种子液的制备将芽孢杆菌CP‑3用无菌牙签挑取于LB液体培养基中，37℃摇床上过夜培养，得芽孢杆菌CP‑3种子液；（2）微生物修复菌剂的制备 将芽孢杆菌CP‑3种子液以发酵培养基体积的4%接种于发酵培养基中，35℃，160 r/min摇床培养2 天，得发酵液；将草炭土高压蒸汽灭菌，冷却后将所得发酵液与草炭土按V:W为1:2混匀，室温风干，成微生物修复菌剂；所述的发酵培养基是由重量百分计的：葡萄糖1%，大豆蛋白胨3%， CuSO₄  0.1%， KCl 0.1%和余量为水，调pH 7.0制成；三、苏丹草‑微生物联合修复铬污染土壤将微生物修复菌剂均匀撒播于土壤表层，翻耕土壤，深度为15‑25cm，耙平，均匀撒入苏丹草种子，播种量为1.5—2kg/亩，上部覆盖土层，厚度1.5‑2cm，均匀浇水，保持土壤湿润状态，种子发芽后，按苏丹草常规栽培管理，60天后即可使土壤中的含铬量降低72.9‑88.7%，达到土壤环境要求标准，实现对铬污染土壤的修复。