[发明专利]一种利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法

权利要求书

1.一种利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法，其特征在于，由以下步骤实现：

一、耐铬微生物的筛选

采集化工厂附近铬污染土样，采用多点随机采样法采集土壤样品混合均匀，去除动植物残体，过筛后装入无菌袋低温保存带回实验室，进行耐铬微生物的分离；将铬污染土壤与灭菌水以重量比1︰9制成混悬液，然后再用混悬液10倍体积的灭菌水进行稀释，涂布于LB固体培养基平板上，28～32℃培养1～2天，挑取单菌落，平板划线法划线于LB固体培养基平板上，37℃恒温培养箱过夜培养，成纯化的单菌落；

取纯化的单菌落分别接种到Cr(VI)浓度为100mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L的LB固体培养基平板上，28～32℃培养1～2天，筛选出最强的耐铬菌落，对其单菌落采用平板划线分离法进行纯化，得纯化菌株，经生理生化和16SrDNA测定为芽孢杆菌CP-3，分类命名为芽孢杆菌（Bacillussp），并于2014年11月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.9990，地址：北京市朝阳区北辰西路3号；

二、制备微生物修复菌剂

（1）种子液的制备

将芽孢杆菌CP-3用无菌牙签挑取于LB液体培养基中，37℃摇床上过夜培养，得芽孢杆菌CP-3种子液；

（2）微生物修复菌剂的制备

将芽孢杆菌CP-3种子液以发酵培养基体积的4%接种于发酵培养基中，35℃，160r/min摇床培养2天，得发酵液；将草炭土高压蒸汽灭菌，冷却后将所得发酵液与草炭土按V:W为1:2混匀，室温风干，成微生物修复菌剂；

所述的发酵培养基是由重量百分计的：葡萄糖1%，大豆蛋白胨3%，CuSO₄0.1%，KCl0.1%和余量为水，调pH7.0制成；

三、苏丹草-微生物联合修复铬污染土壤

将微生物修复菌剂均匀撒播于土壤表层，翻耕土壤，深度为15-25cm，耙平，均匀撒入苏丹草种子，播种量为1.5—2kg/亩，上部覆盖土层，厚度1.5-2cm，均匀浇水，保持土壤湿润状态，种子发芽后，按苏丹草常规栽培管理，60天后即可使土壤中的含铬量降低72.9-88.7%，达到土壤环境要求标准，实现对铬污染土壤的修复。

2.根据权利要求1所述的利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法，其特征在于，步骤一所述的LB固体培养基为：蛋白胨1g、酵母提取物0.5g和氯化钠0.5g，加蒸馏水至100mL，调pH至7.2～7.4，成液体培养基，再加液体培养基重量1.5%～2.0%的琼脂，高压灭菌，成LB固体培养基。

3.根据权利要求1所述的利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法，其特征在于，步骤一所述的灭菌水是蒸馏水经灭菌后的水。

4.根据权利要求1所述的利用苏丹草与高效微生物联合修复铬污染土壤的方法，其特征在于，步骤三所述的土壤为粘土、沙壤土、微酸性土壤或微碱性土壤。