[发明专利]一种高效体外扩增自体NK细胞的培养体系及培养方法

摘要

本高效体外扩增自体NK细胞的培养体系及培养方法，培养体系包括含GT-T551基础培养基、白细胞介素IL-2、白细胞介素IL-12、白细胞介素IL-15、白细胞介素IL-18、白细胞介素IL-17、白细胞介素IL-22和天然中药物质。培养方法为：采集并分离自体40ml外周血单个核细胞，用含10％自身血浆培养基重悬细胞，加入到用CD3抗体或CD56抗体包被的细胞培养瓶中，细胞因子组合A刺激，置于37℃、5％CO2培养箱中孵育并振摇，6-7天后转入细胞培养袋中培养并补加含细胞因子组合B培养基，培养期间，每隔3-4天在含有IL-2基础培养基培养，共培养17-19天可得到高纯度性的NK细胞。本培养基及培养方法能使NK细胞体外扩增1000倍以上，获得超过5X10⁹次方的高纯度NK细胞。

主权项

一种高效体外扩增自体NK细胞的培养体系，其特征在于，所述的培养体系包括含GT‑T551基础培养基、特异因子组合A和特异因子组合B；所述的特异因子组合A包含IL‑2、IL‑12、IL‑15、lL‑17，IL‑18、IL‑22，其中IL‑2浓度为1000u/ml、IL‑12的浓度为100‑200ng/ml、IL‑15的浓度为100‑200ng/ml、IL‑17的浓度为200‑400ng/ml、IL‑18的浓度为100‑200ng/ml、IL‑22的浓度为100‑200ng/ml；所述的特异因子组合B包含来自天然中药物质提取物的单个成分或多个成分组合：为人参皂苷、三七皂苷、紫杉醇、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、黄芩素、沙苑子总黄酮、姜黄素、云芝多糖中的一种或两种物质组合，其浓度分别为人参皂苷2‑5ug/ml、三七皂苷2‑5ug/ml、紫杉醇2‑6ug/ml、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)5‑8ug/ml、黄芩素5‑8ug/ml、沙苑子总黄酮3‑5ug/ml、姜黄素3‑5ug/ml、云芝多糖5‑10ug/ml。