[发明专利]一种高效体外扩增自体NK细胞的培养体系及培养方法

权利要求书

1.一种高效体外扩增自体NK细胞的培养体系，其特征在于，所述的培养体系包括含GT-T551基础培养基、特异因子组合A和特异因子组合B；所述的特异因子组合A包含IL-2、IL-12、IL-15、lL-17，IL-18、IL-22，其中IL-2浓度为1000u/ml、IL-12的浓度为100-200ng/ml、IL-15的浓度为100-200ng/ml、IL-17的浓度为200-400ng/ml、IL-18的浓度为100-200ng/ml、IL-22的浓度为100-200ng/ml；所述的特异因子组合B包含来自天然中药物质提取物的单个成分或多个成分组合：为人参皂苷、三七皂苷、紫杉醇、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、黄芩素、沙苑子总黄酮、姜黄素、云芝多糖中的一种或两种物质组合，其浓度分别为人参皂苷2-5ug/ml、三七皂苷2-5ug/ml、紫杉醇2-6ug/ml、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)5-8ug/ml、黄芩素5-8ug/ml、沙苑子总黄酮3-5ug/ml、姜黄素3-5ug/ml、云芝多糖5-10ug/ml。

2.根据权利要求1所述的一种高效体外扩增自体NK细胞的培养体系，其特征在于，所述的NK细胞是来自体，其来源为健康人或肿瘤患者的外周血液。

3.根据权利要求2所述的一种高效体外扩增自体NK细胞的培养体系，其特征在于，所述的培养体系中不含动物血清。

4.一种高效体外扩增自体NK细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：采集并分离自体40ml外周血的单个核细胞，用含10％自身血浆的培养基重悬细胞，加入到用CD3抗体或CD56抗体包被的细胞培养瓶中，细胞因子组合A刺激，置于37℃、5％CO2的培养箱中孵育，并以一定速度振摇，6-7天后转入细胞培养袋中培养并补加含细胞因子组合B的培养基，培养期间，每隔3-4天在含有IL-2的基础培养基培养，共培养17-19天即可得到高纯度性的NK细胞。

5.根据权利要求4所述的一种高效体外扩增自体NK细胞的培养方法，其特征在于，在分离单个核细胞开始记第1天，细胞因子组合A加样于第1天，特异组合物B加样于第7天，前7天，每2天添加含IL-2的GT-T551培养基，后10-12天每3-4天添加含IL-2的GT-T551培养基。

6.根据权利要求4所述的一种高效体外扩增自体NK细胞的培养方法，其特征在于，所述细胞培养瓶中包被抗CD-56单克隆抗体。

7.根据权利要求4所述的一种高效体外扩增自体NK细胞的培养方法，其特征在于，所述细胞培养瓶振摇时，在约1-2下/分钟的振摇频率下进行，振摇角度为0-4度。

8.根据权利要求4所述的一种高效体外扩增自体NK细胞的培养方法，其特征在于，培养的NK细胞含量在5X10⁹细胞数，培养的NK细胞纯度不低于80％。

9.根据权利要求4所述的一种高效体外扩增自体NK细胞的培养方法，其特征在于，培养的NK细胞中不含T细胞及B细胞。