[发明专利]测定影响根际土壤氨基酸有效性因素的方法

摘要

本发明提供一种测定影响根际土壤氨基酸有效性因素的方法，通过采集具有代表性的地带性土壤，进行样品前处理：过筛、研磨，放置于人工温室中培养植物，添加标记氨基酸，土壤植物样品处理测定土壤的理化性质，与氨基酸吸收量进行线性相关分析，研究影响土壤氨基酸生物有效性的主要土壤因素。本发明方法操作简单，通过相关性检测可以在复杂的因素中找到对氨基酸生物有效性显著影响的因素，对研究及调控氨基酸的生物有效性提供了方法基础。

主权项

 一种测定影响根际土壤氨基酸有效性因素的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）土壤样品采集：采集地带性土壤15个，取0‑15cm的表层土壤5kg，同时准确记录取样点位置及种植制度和植被类型；（2）样品前处理：样品挑出石块及根系后，过4mm筛后放置于通风干燥处风干，之后研磨过2mm筛，装袋备用；（3）植物种植：称取47g风干土壤样品，放置于50ml离心管中，轻微震荡离心管，避免出现空隙，该离心管直径为25mm，高度为120mm，取预先放置于培养皿中发芽的植物种子，放置于离心管的土壤中心，称取3g相同土壤覆盖种子，采用移液枪向土壤中缓慢添加10ml纯净水，之后将离心管放置于人工温室中培养植物，根据离心管中土壤干湿度及时添加水分，且要一次浇透；（4）添加标记氨基酸：培养15‑35天后，植物根系长满整个离心管，离心管中土壤均为根际土壤，选取土壤含水量相对较低的时期，采用2mm直径的铁棒打三个小孔，采用移液枪向土壤中添加含200μmolL^‑1的¹³C,¹⁵N‑Glycine溶液10ml；（5）土壤植物样品处理及测定：吸收4h后迅速将植物连同土壤从离心管中取出，将土壤与根系分离开来后，迅速用自来水冲洗根系，之后在超声波中清洗5min，用0.5molL^‑1氯化钙冲洗三次，纯净水冲洗三次，最后放置于冻干机冷冻干燥后，称重，用球磨仪粉碎，样品高温消煮氧化，全氮含量用半微量凯氏定氮仪蒸馏，最后用0.01 mol L‑1硫酸滴定，采用同位素质谱仪测定植株不同部位的15N丰度值，在处理植物样品的同时，将土壤放于4℃冰箱中保存，之后测定土壤的理化性质，与氨基酸吸收量进行线性相关分析，研究影响土壤氨基酸生物有效性的主要土壤因素。