[发明专利]一种利用超疏水表面结晶蛋白质的方法

摘要

本发明公开了一种利用超疏水表面结晶蛋白质的方法，该方法是在超疏水表面滴加蛋白质溶液，然后在密闭容器中使蛋白质溶液中的水缓慢挥发，蛋白质浓度逐渐增大最终达到其结晶的浓度，析出结晶并生长。本发明方法能够快速有效的得到蛋白质晶体(如溶菌酶可在几小时内完成结晶)，且极大地降低了蛋白质结晶所需浓度；另外，本发明结晶蛋白质的方法不需要加入有毒的沉淀剂(如2‑甲基‑2,4‑戊二醇、苯甲基磺酰氯等有毒物质)，温和环保，且具有可控性，可通过滴加不同蛋白质溶液的体积得到不同尺寸的晶体，适用于大规模蛋白质结晶的生产。本发明操作简单，快速，温和，具有潜在的生物医药前景。

主权项

1.一种利用超疏水表面结晶蛋白质的方法，其特征在于：将包含蛋白质的缓冲液滴加到具有超疏水表面的基材上，在密闭容器中加入缓冲液，然后将基材置于盛有缓冲液的密闭容器上方，4～40℃放置至晶体析出；上述的蛋白质为溶菌酶或β‑酮脂酰‑ACP合成酶或刀豆蛋白A或牛血清蛋白；上述的具有超疏水表面的基材是表面具有微纳尺度溶菌酶相转变产物的基材或表面具有微纳尺度铜的基材或表面具有微纳尺度SiO2的基材，其中所述基材为硅片、玻璃、Cu片中的任意一种；上述表面具有微纳尺度溶菌酶相转变产物的基材的制备方法为：将含溶菌酶的HEPES缓冲液和含三(2‑羧乙基)膦的HEPES缓冲液等体积混合后用NaOH调节pH值为6.0～10.0，所得混合液中溶菌酶的浓度为2～5mg/mL，三(2‑羧乙基)膦的浓度为20～30mmol/L；将所得混合液滴加到基材表面，在潮湿环境中室温培养1～2小时，然后将基材表面用超纯水清洗干净，真空干燥，得到负载微纳结构溶菌酶相转变产物的基材；在负载微纳结构溶菌酶相转变产物的基材上修饰低表面能物质，其中所述的低表面能物质为全氟辛酰氯、全氟十二烷基三氯硅烷、1H,1H,2H,2H‑全氟辛基三氯硅烷、4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,11‑十七氟十一酰氯、十八碳酰氯、十六碳酰氯中的任意一种，得到表面具有微纳尺度溶菌酶相转变产物的基材；上述表面具有微纳尺度铜的基材的制备方法为：将50mL含有50mmol/L EDTA、50mmol/L CuSO4、0.1mol/L硼酸的水溶液用1mol/L NaOH水溶液调节pH值至7.0后，将负载微纳结构溶菌酶相转变产物的基材浸入其中，再加入50mL 0.1mol/L二甲胺硼烷水溶液，30℃反应3小时，得到表面具有微纳尺度铜的基材；上述表面具有微纳尺度SiO2的基材的制备方法为：将基材放置在蜡烛上方，点燃蜡烛3～5分钟，即得到负载微纳结构碳黑的基材；将负载微纳结构炭黑的基材置于干燥器中，并在干燥器中放置盛有四乙氧基硅烷和氨水的体积比为1:1的混合液的小烧杯，24小时后炭黑表面沉积上一层SiO2，然后将该基材置于马弗炉中600℃煅烧2小时，炭黑被烧掉，得到表面只有微纳结构SiO2层的基材，再将该基材置于盛有1H,1H,2H,2H‑全氟辛基三氯硅烷的密闭容器上方，室温真空密闭放置3小时，得到表面具有微纳尺度SiO2的基材。