[发明专利]塑料袋联合聚蔗糖泛影葡胺分离法建立免疫细胞库及应用

摘要

本发明公开了塑料袋联合聚蔗糖泛影葡胺分离法建立免疫细胞库构建方法和应用，本发明的构建步骤包括：(1)带针头塑料袋，采集静脉血，肝素抗凝，检测传染病病毒和免疫细胞数量；(2)加入生理盐水稀释；(3)聚蔗糖泛影葡胺溶液加入带导管的塑料袋；(4)将(1)所得加入(3)聚蔗糖泛影葡胺溶液界面上；(5)离心；(6)塑料袋收集白膜层和上层血浆；(7)离心；(8)收集沉淀，获得所需免疫细胞；(9)加入冷冻保护剂；(10)置液氮中冷冻保存，将免疫细胞详细信息，包括姓名、性别、年龄、免疫细胞数量、传染病病毒结果等，输入电脑，建立完善的数据档案，即构建出免疫细胞库。本发明成本低廉，有抗肿瘤应用价值。

主权项

一种塑料袋联合聚蔗糖泛影葡胺分离法建立免疫细胞库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，分离静脉血中免疫细胞，其步骤包括：(1)使用带针头的塑料袋，采集静脉血30～100mL，肝素抗凝，经检测后，按照质量/体积比1∶1的比例，加入1倍体积的生理盐水，充分混匀。(2)取带导管塑料袋一只，按照稀释静脉血质量/体积比1∶1/3～1/4的比例，加入1/3～1/4体积的聚蔗糖泛影葡胺溶液。(3)将步骤(1)所获得静脉血稀释液，缓慢的通过导管，加入到步骤(2)所得塑料袋含聚蔗糖泛影葡胺溶液界面上。(4)将步骤(3)所获得的塑料袋，离心，中间层是白膜层，含大量免疫细胞。(5)将步骤(4)获得免疫细胞的塑料袋，悬于压浆板，操作压浆板，将塑料袋中的白膜层和血浆通过导管挤压到另外一只塑料袋中。(6)步骤(5)所获得的含白膜层的塑料袋，离心，免疫细胞沉淀，弃上清，即获得免疫细胞。第二步，构建免疫细胞库，其步骤包括：将获得免疫细胞加入冷冻保护剂，装入冻存管，程序降温后，将冻存管保存在‑196℃液氮罐中。将其详细信息(包括姓名、性别、年龄、地址、联系方式、免疫细胞数量、各种检查结果等信息)输入电脑，建立完善的数据档案备查。