[发明专利]塑料袋联合聚蔗糖泛影葡胺分离法建立免疫细胞库及应用

权利要求书

1.一种塑料袋联合聚蔗糖泛影葡胺分离法建立免疫细胞库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步，分离静脉血中免疫细胞，其步骤包括：

(1)使用带针头的塑料袋，采集静脉血30～100mL，肝素抗凝，经检测后，按照质量/体积比1∶1的比例，加入1倍体积的生理盐水，充分混匀。

(2)取带导管塑料袋一只，按照稀释静脉血质量/体积比1∶1/3～1/4的比例，加入1/3～1/4体积的聚蔗糖泛影葡胺溶液。

(3)将步骤(1)所获得静脉血稀释液，缓慢的通过导管，加入到步骤(2)所得塑料袋含聚蔗糖泛影葡胺溶液界面上。

(4)将步骤(3)所获得的塑料袋，离心，中间层是白膜层，含大量免疫细胞。

(5)将步骤(4)获得免疫细胞的塑料袋，悬于压浆板，操作压浆板，将塑料袋中的白膜层和血浆通过导管挤压到另外一只塑料袋中。

(6)步骤(5)所获得的含白膜层的塑料袋，离心，免疫细胞沉淀，弃上清，即获得免疫细胞。

第二步，构建免疫细胞库，其步骤包括：

将获得免疫细胞加入冷冻保护剂，装入冻存管，程序降温后，将冻存管保存在-196℃液氮罐中。将其详细信息(包括姓名、性别、年龄、地址、联系方式、免疫细胞数量、各种检查结果等信息)输入电脑，建立完善的数据档案备查。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，检测包括：乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、艾滋病病毒抗体、梅毒螺旋体特异性抗体、厌氧菌培养、需氧菌培养、血细胞三分类检测、免疫细胞CD3、CD4、CD56、CD8检测。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，离心机转速为1800～2000转/分钟，时间为18～20分钟。

4.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(6)中，离心机转速为1000～1300转/分钟，时间10～15分钟。

5.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述第二步中，冷冻保护剂配方是含10％(体积百分比)二甲基亚砜，10％(体积百分比)白蛋白，80％(体积百分比)RPMI1640培养液构成。

6.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述第二步中，程序降温速率为-1℃～-3℃/分钟，温度降至-80℃～-90℃。

7.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述第二步中，构建免疫细胞库在抗肿瘤方面的应用。