[发明专利]一种高纯度大米谷蛋白的提取方法

摘要

一种高纯度大米谷蛋白的提取方法，涉及一种大米谷蛋白的提取方法。本发明是要解决现有用稀碱提取谷蛋白的方法导致蛋白质的变性和水解，美拉德反应加剧，产生黑褐色物质的问题。方法：一、将大米研磨成米粉；二、将米粉用正己烷脱脂，得到脱脂米粉；三、将脱脂米粉去除清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白，得到沉淀；四、对步骤三得到的沉淀用乳酸浸提谷蛋白；五、合并每次浸提收集的上清液，用TCA溶液将上清液进行蛋白沉淀；六、用PBS缓冲液清洗沉淀，将清洗后的沉淀真空冷冻干燥，即得到大米谷蛋白。本发明方法所提取的谷蛋白纯度可高达93.67％～96.71％，可广泛应用于工业化大批量提取大米谷蛋白。

主权项

1.一种高纯度大米谷蛋白的提取方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、将大米研磨成米粉；二、将米粉用正己烷脱脂3～5次，得到脱脂米粉；三、将脱脂米粉去除清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白，得到沉淀；四、对步骤三得到的沉淀用浓度为0.8％～1.2％(w/v)的乳酸浸提谷蛋白3～5次；五、合并每次浸提收集的上清液，用浓度为8％～12％(w/v)的TCA溶液将上清液进行蛋白沉淀；六、用PBS缓冲液清洗沉淀3～5次，将清洗后的沉淀真空冷冻干燥，即得到大米谷蛋白；步骤一中将大米研磨成米粉的具体方法为：用粉碎机粉碎新鲜大米，每次15‑20s，总共30‑40次；步骤二中将米粉用正己烷脱脂的具体方法为：A、将米粉与正己烷按照1g:4～6mL的比例混合，室温搅拌1h，静置1h，然后于4000rpm离心20min后收集沉淀；B、重复步骤A2～4次，将收集的沉淀于30℃水浴中晾干，得到脱脂米粉；步骤三中将脱脂米粉去除清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白的具体方法为：A、将脱脂米粉与去离子水按照1g:10～12mL的比例混合，25℃130rpm水浴振荡8h，离心后收集沉淀；B、将步骤A的沉淀加入与步骤A中相同体积的去离子水，混匀，25℃130rpm水浴振荡8h，离心后收集沉淀；C、将步骤B的沉淀加入与步骤A中相同体积的去离子水，混匀，25℃130rpm水浴振荡4h，离心后收集沉淀，即为去除了清蛋白的沉淀；D、然后将去离子水换为浓度为5％(w/v)的NaCl溶液，每次加的5％NaCl溶液体积与步骤A中去离子水体积相同，重复进行步骤A～C，收集沉淀，即为去除了清蛋白和球蛋白的沉淀；E、然后将去离子水换为58％(v/v)的正丙醇溶液，每次加的58％的正丙醇溶液体积与步骤A中去离子水体积相同，重复进行步骤A～C，收集沉淀，即为去除了清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白的沉淀；其中所述离心的条件均为：1～6℃，10000g，20min；步骤四中对步骤三得到的沉淀用浓度为0.8％～1.2％(w/v)的乳酸浸提谷蛋白的具体方法为：①向步骤三收集的沉淀中加入浓度为0.8％～1.2％(w/v)的乳酸溶液，沉淀与乳酸的比例关系是1g:10～12mL，混匀，25℃130rpm水浴振荡8h，离心后收集沉淀和上清；②重复步骤①2～4次，每次离心后均收集沉淀和上清，其中所述离心的条件均为：1～6℃，10000g，20min；步骤五中用TCA溶液将每次浸提得到的上清进行蛋白沉淀的具体方法为：将步骤四中每次收集得到的上清液加入浓度为8％～12％(w/v)的TCA溶液，上清液与TCA溶液的体积比为1:3～5，避光条件下于0～4℃冰浴15～20min；然后离心弃掉上清液，取沉淀，其中所述离心的条件为：1～6℃，10000g，20min；步骤六中真空冷冻干燥的条件为：真空度≤15Pa，冷阱温度为50℃～60℃，样品温度为‑30℃～‑20℃，冻干时间为20h～24h。