[发明专利]一种免疫层析试纸及其制备、使用方法

摘要

本发明公开一种具备氧化还原酶活性的、由合金纳米粒子为生物标记物的免疫层析试纸，以及这种试纸的制备及使用方法。本发明试纸是在底板依次线性排列地设置样品吸收垫、包被有Au‑Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫、硝酸纤维膜和吸水垫，在硝酸纤维素膜上包被有质控线与检测线。本发明试纸再加上加入苯胺类、酚或咔唑类显色剂即可构成相应的检测试剂盒。本发明可避免现有胶体金检测技术的缺点和不足，能提高检测灵敏度2‑3个数量，且实验过程的简便，可操作性强，不仅产品有巨大的市场潜力，而且也为检测科学提供了一种新的更为有效的手段。

主权项

一种具备氧化还原酶活性的合金纳米材料为标记物的免疫层析检测盒，其特征在于检测盒包括具备氧化还原酶活性的合金纳米材料为标记物的免疫层析试纸，以及苯胺类或酚或咔唑类的显色剂；所述试纸的制备方法包括以下步骤：a.首先在超纯水40.0mL中依次加入490μL2.9×10－2mol/LHAuCl4和10μL2.9×10－2mol/L H2PtCl6溶液，及3.5mL10mg/mL的柠檬酸三钠并搅拌混匀，再向混合液中缓慢滴加3.5mL新配制的0.5mg/mLNaBH4，使其颜色由无色变紫色最终变为深红色，最后用水定容至50mL，得到Au‑Pt合金纳米粒子溶液；b.调整Au‑Pt合金纳米粒子溶液的pH使其适合于将要标记的蛋白等电点，再在其中加入所用的抗体或抗原蛋白，得到免疫Au‑Pt合金纳米粒子标记蛋白的溶液；c.将Au‑Pt合金纳米粒子标记蛋白用玻璃纤维材料吸附，得到包被有标记抗原的垫；d.分别确定用作质控带和检测带的抗原或抗体；e.在不透水材料的底板上依次线性固定有吸水材料制成的样品吸收垫、包被有Au‑Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫、硝酸纤维膜和吸水材料制成的吸水垫，并确保：样品吸收垫与连接垫间、连接垫与硝酸纤维膜间和硝酸纤维素膜和吸水垫间相互重叠，形成良好连接；f.在硝酸纤维膜上分别喷上用作质控带的抗原或抗体的质控线和用作检测带的抗原或抗体的检测线，其中检测线与质控线两线间距离保持在一合适的距离，得到试纸；g.再将试纸切割成所需要宽度的条状。