[发明专利]一种免疫层析试纸及其制备、使用方法

权利要求书

1.一种具备氧化还原酶活性的合金纳米材料为标记物的免疫层析检测盒，其特征在于检测盒包括具备氧化还原酶活性的合金纳米材料为标记物的免疫层析试纸，以及苯胺类或酚或咔唑类的显色剂；

所述试纸的制备方法包括以下步骤：

a.首先在超纯水40.0mL中依次加入490μL2.9×10^－2mol/LHAuCl₄和10μL2.9×10^－2mol/L H₂PtCl₆溶液，及3.5mL10mg/mL的柠檬酸三钠并搅拌混匀，再向混合液中缓慢滴加3.5mL新配制的0.5mg/mLNaBH₄，使其颜色由无色变紫色最终变为深红色，最后用水定容至50mL，得到Au-Pt合金纳米粒子溶液；

b.调整Au-Pt合金纳米粒子溶液的pH使其适合于将要标记的蛋白等电点，再在其中加入所用的抗体或抗原蛋白，得到免疫Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的溶液；

c.将Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白用玻璃纤维材料吸附，得到包被有标记抗原的垫；

d.分别确定用作质控带和检测带的抗原或抗体；

e.在不透水材料的底板上依次线性固定有吸水材料制成的样品吸收垫、包被有Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫、硝酸纤维膜和吸水材料制成的吸水垫，并确保：样品吸收垫与连接垫间、连接垫与硝酸纤维膜间和硝酸纤维素膜和吸水垫间相互重叠，形成良好连接；

f.在硝酸纤维膜上分别喷上用作质控带的抗原或抗体的质控线和用作检测带的抗原或抗体的检测线，其中检测线与质控线两线间距离保持在一合适的距离，得到试纸；

g.再将试纸切割成所需要宽度的条状。

2.权利要求1所述的检测盒的使用方法，其特征在于先将含有被检测物抗原或抗体的溶液滴在样品吸收垫上，使其与试纸上的包被有Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料的区域以及硝酸纤维膜区域进行反应，待反应结束后，再向硝酸纤维膜区域加入苯胺类、酚或咔唑类显色剂进行显色，即可根据试纸上是否同时显现蓝黑色的质控带和检测带确定被检样品的阴阳性，或者再利用呈色分析仪或其它读取设备进行分析，得出定量或半定量的检测结果。

3.权利要求2所述的检测盒的使用方法用于非疾病诊断的检测方法。

4.一种可定量检测O型口蹄疫病毒的免疫层析试纸或可定量检测p53的免疫层析试纸的非疾病诊断使用方法，其特征在于先将含有被检测物抗原或抗体的溶液滴在该试纸上的样品吸收垫，使其在包被有Au-Pt合金纳米粒子的玻璃纤维材料的区域和硝酸纤维素膜的区域进行反应，待反应结束后，再向硝酸纤维素膜上的反应区加入苯胺类、酚或咔唑类显色剂进行显色，即可根据试纸上是否同时显现蓝黑色的质控带和检测带确定被检样品的阴阳性，或者再利用呈色分析仪或其它读取设备进行分析，得出定量或半定量的检测结果；

所述可定量检测O型口蹄疫病毒的免疫层析试纸，包括：底板、设置于底板上依次线性排列的样品吸收垫、包被有Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫、硝酸纤维膜和吸水纸，在硝酸纤维素膜上包被有质控线与检测线，样品吸收垫与连接垫间、连接垫与硝酸纤维膜间和硝酸纤维素膜和吸水纸间相互重叠连接，包被有Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫蛋白为与Au-Pt合金纳米粒子相结合的O型标准株豚鼠纯化抗体，检测线包被的是口蹄疫O型流行株兔纯化抗体，质控线为羊抗豚鼠抗体；

所述可定量检测p53的免疫层析试纸，包括：底板、设置于底板上依次线性排列的样品吸收垫、包被有Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫、硝酸纤维膜和吸水纸组成，在硝酸纤维素膜上包被有质控线与检测线，样品吸收垫与连接垫间、连接垫与硝酸纤维膜间和硝酸纤维素膜和吸水纸间相互重叠连接，包被有Au-Pt合金纳米粒子标记蛋白的玻璃纤维材料构成的连接垫上的蛋白为与Au-Pt合金纳米粒子相结合的兔抗p53抗体，检测线包被的是鼠抗p53单克隆抗体，质控线为羊抗兔抗体。

5.苯胺类、酚或咔唑类显色剂的用途，其特征在于用于Au-Pt合金纳米粒子包被有标记抗原与抗体结合产生免疫反应后的显色。

6.根据权利要求5所述的苯胺类、酚或咔唑类显色剂的用途，其特征在所用的显色剂为TMB。