[发明专利]家蝇胚胎细胞构建抗菌肽attacin真核表达系统所表达的产物及构建方法

摘要

本发明涉及一种家蝇胚胎细胞构建抗菌肽attacin真核表达系统所表达的产物及构建方法。以家蝇抗菌肽attacin为目标基因，重组杆状病毒Bacmid-pFastBac^TM-attacin转染建立的家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,构建抗菌肽attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统。全基因合成家蝇抗菌肽attacin，将目的基因attacin克隆入PUC57质粒，重组质粒经双酶切后连接到pFastBac^TMHTA供体质粒，重组杆状病毒Bacmid DNA；重组杆状病毒Bacmid DNA转染家蝇胚胎细胞MDEC-07114中，提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白，经镍柱纯化，SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达进行检测、鉴定，对表达产物进行抗菌活性检测。

主权项

家蝇胚胎细胞MDEC‑07114构建抗菌肽attacin的杆状病毒真核表达系统表达产物及构建方法抗菌肽attacin通过构建的重组杆状病毒（Bacmid‑pFastBacTM‑attacin）在自建家蝇胚胎细胞MDEC‑07114中得到表达，由于该家蝇胚胎细胞为本发明申请人独家拥有，实验证实该细胞可作为抗菌肽的真核表达工具；经证实，抗菌肽attacin在该细胞中的表达这一技术发明是首例；其特征在于：以家蝇抗菌肽attacin为目标基因，全基因合成家蝇抗菌肽attacin克隆入PUC57质粒，重组质粒经双酶切后连接到pFastBac^TMHTA供体质粒，将制备重组杆状病毒Bacmid DNA（Bacmid‑pFastBac^TM‑attacin）转染自行建立的家蝇胚胎细胞系MDEC‑07114,构建抗菌肽attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统，表达产物经SDS‑PAGE和Western‑Blot检测，证实抗菌肽attacin在家蝇胚胎细胞表达成功，表达产物具有抗菌活性。