[发明专利]16种型别HPV病毒的检测引物、探针及试剂盒

摘要

本发明公开了16种型别HPV病毒的检测引物、探针及试剂盒，该引物及探针可以快速、准确、简便地对HPV病毒相关性疾病进行筛查，不与其他病毒发生交叉反应，能同时检测出常见的HPV高危型和低危型，共2种HPV低危型和14种HPV高危型，且HPV高危型覆盖范围广，比目前市场上的试剂盒检测更为准确和全面。本发明的试剂盒还包括阴性、阳性和弱阳性质控品，进一步增加了检测的准确性。

主权项

一种检测16种型别HPV病毒的试剂盒，其特征在于，包括16种型别HPV病毒的检测引物和探针，还包括PCR反应液，阳性质控品和阴性质控品；其中，阴性质控品为灭菌生理盐水；阳性质控品和弱阳性质控品是以提纯的16种型别HPV病毒基因组为模板，由16种型别相应的基因扩增引物进行PCR扩增，16种扩增产物连接，经基因测序确认正确后包装所得的假病毒；探针序列的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，各型别检测引物及探针序列如下：HPV6型：上游引物HPV6‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:1，下游引物HPV6‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:2，Taqman荧光探针HPV6‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:3；HPV11型：上游引物HPV11‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:4，下游引物HPV11‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:5，Taqman荧光探针HPV11‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:6；HPV16型：上游引物HPV16‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:7，下游引物HPV16‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:8，Taqman荧光探针HPV16‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:9；HPV18型：上游引物HPV18‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:10，下游引物HPV18‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:11，Taqman荧光探针HPV18‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:12；HPV31型：上游引物HPV31‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:13，下游引物HPV31‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:14，Taqman荧光探针HPV31‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:15；HPV33型：上游引物HPV33‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:16，下游引物HPV33‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:17，Taqman荧光探针HPV33‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:18；HPV35型：上游引物HPV35‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:19，下游引物HPV35‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:20，Taqman荧光探针HPV35‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:21；HPV39型：上游引物HPV39‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:22，下游引物HPV39‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:23，Taqman荧光探针HPV39‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:24；HPV45型：上游引物HPV45‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:25，下游引物HPV45‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:26，Taqman荧光探针HPV45‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:27；HPV51型：上游引物HPV51‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:28，下游引物HPV51‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:29，Taqman荧光探针HPV51‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:30；HPV52型：上游引物HPV52‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:31，下游引物HPV52‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:32，Taqman荧光探针HPV52‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:33；HPV56型：上游引物HPV56‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:34，下游引物HPV56‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:35，Taqman荧光探针HPV56‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:36；HPV58型：上游引物HPV58‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:37，下游引物HPV58‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:38，Taqman荧光探针HPV58‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:39；HPV59型：上游引物HPV59‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:40，下游引物HPV59‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:41，Taqman荧光探针HPV59‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:42；HPV66型：上游引物HPV66‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:43，下游引物HPV66‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:44，Taqman荧光探针HPV66‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:45；HPV68型:上游引物HPV68‑F：核苷酸序列如SEQ ID NO:46，下游引物HPV68‑R：核苷酸序列如SEQ ID NO:47，Taqman荧光探针HPV68‑P：核苷酸序列如SEQ ID NO:48；所述荧光报告基团选自6‑羧基荧光素、六氯‑6‑甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯‑6‑羧基荧光素、羧基‑X‑罗丹明、6‑羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、6‑羧基‑4’,5’‑二氯‑2’,7’‑二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5和花菁5.5中的至少一种；所述荧光淬灭基团选自6‑羧基四甲基罗丹明、4‑(4‑二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬灭剂1、黑洞淬灭剂2或黑洞淬灭剂3中的至少一种。