[发明专利]DNA分子克隆方法有效
| 申请号： | 201510355929.0 | 申请日： | 2015-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN104911199B | 公开（公告）日： | 2018-04-27 |
| 发明（设计）人： | 言普;周鹏;沈文涛;黎小瑛 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/63 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司44202 | 代理人： | 郝传鑫 |
| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种DNA分子克隆方法，其包括获得含有ccdB基因的目标载体，所述ccdB基因两端带有SfiI酶切位点、第一接头序列及第二接头序列，所述接头序列为15‑30bp，所述接头序列在SfiI酶切位点外围；获得目标基因，所述目标基因经PCR扩增使其两端同样带有接头序列，其序列与上述第一接头序列和第二接头序列分别一致；将所述含有ccdB基因的目标载体与所述目标基因，SfiI酶和Gibson克隆反应液混合反应，再经转化大肠杆菌获得重组克隆。通过本发明的方法可将DNA通过一步反应直接克隆到环状的目标载体，不受目标DNA序列限制，并且零背景。 | ||
| 搜索关键词： | dna 分子 克隆 方法 | ||
【主权项】：
一种DNA分子克隆方法，所述方法包括如下步骤：获得含有ccdB基因的目标载体，所述ccdB基因两端分别具有SfiI酶切位点和第一接头序列及第二接头序列，所述第一接头序列和第二接头序列为15‑30bp，所述第一接头序列和第二接头序列分别在SfiI酶切位点两侧；获得目标基因，所述目标基因两端分别带有第三接头序列及第四接头序列，其中所述第一接头序列与第三接头序列序列一样，所述第二接头序列和第四接头序列一样；第一接头序列为ACCTAGGTTCTGGGCCAGGA，第二接头序列为CCTGAGACCGAAGGCCCAGA；将所述含有ccdB基因的目标载体与所述目标基因，SfiI酶和Gibson克隆反应液混合反应。
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