[发明专利]一种鱼类疫苗的制备方法

摘要

本发明提供了一种采用纳米壳聚糖作为载体的鱼类疫苗的制备方法，壳聚糖能和带负电的三聚磷酸盐在非常温和的条件下，通过离子胶凝作用形成纳米粒；而且可通过静电作用将大量蛋白包裹进这种纳米粒中。本发明使用pH为6的乙酸/乙酸钠缓冲液溶解壳聚糖，使得溶液的PH不会过低，减小了在鱼类疫苗药液混合的过程中PH过低对疫苗的破坏。本发明利用粒子凝胶制备包覆鱼类疫苗的壳聚糖纳米微粒,反应条件温和，制备方法简单，使用设备少，具有不破坏抗原、包封率高的优点。

主权项

一种鱼类疫苗的制备方法，包括如下步骤：（1）取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml进行溶解，再加水稀释至500ml，制得pH=6.0的乙酸/乙酸钠缓冲液；（2）用步骤（1）制得的乙酸/乙酸钠缓冲液作为溶剂溶解壳聚糖，制得浓度为2mg/ml的壳聚糖溶液；再向2mg/ml的壳聚糖溶液中加入Tween80，使得壳聚糖溶液中Tween80的质量分数为1﹪；（3）取3ml鱼类疫苗药液与3ml浓度为50mmol／L的硫酸钠溶液混匀，加入到10ml步骤（2）制得的壳聚糖溶液中，边加边搅拌，搅拌速度为800r/min，再向其中逐滴滴加2mg/ml的三聚磷酸钠溶液5ml，溶液变成乳光悬液，继续搅拌10min，进行超声分散，得到分散液；（4）将步骤（3）得到的分散液再以10000r/min的转速高速离心20min，取离心后的沉淀用蒸馏水进行洗涤，再向洗涤后的沉淀中加入NaCl和蒸馏水，使NaCl的质量分数为0.9%，即得。