[发明专利]一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法

摘要

本发明涉及一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，属于白酒分析检测技术领域。本发明通过液相质谱法检测蜀黍苷标准品确定特征离子并建立多重反应监测（LC–MS/MS–MRM）方法、使用LC–MS/MS–MRM方法对白酒酿酒原料高粱中的蜀黍苷定性检测，制作蜀黍苷定量标准曲线对白酒酿酒原料高粱中的蜀黍苷进行准确定量等步骤实现。本发明使用0.1%甲酸-水及乙腈作为流动相对样品中的蜀黍苷进行梯度洗脱分离后串联质谱检测，再通过标准曲线进行准确定量。本发明操作简单，检测灵敏且自动化程度高，特异性高；可进一步利用本方法对不同种类酿酒高粱中的蜀黍苷进行检测，从而对白酒安全进行更好的控制。

主权项

一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，其特征在于步骤为：（1）通过Xevo TQ串联四极杆液相质谱仪检测蜀黍苷标准品来确定其特征离子并建立LC–MS/MS–MRM：a、用甲醇配制200mg/L的蜀黍苷标准品储备液作为最高浓度，用甲醇将其稀释至20mg/L作为蜀黍苷标准使用液；取1mL蜀黍苷标准使用液用微孔滤膜过滤处理后放入2mL样品瓶待进样检测；b、使用Xevo TQ串联四极杆液相质谱仪来检测蜀黍苷标准溶液，液相条件：流动相A：0.1%甲酸‑水；流动相B：乙腈；流速0.3mL/min；洗脱梯度：流动相B 4min由5%线性增加至40%，再1min由40%线性增加至100%，持续1min，再1min由100%线性减少至5%；色谱柱：Waters Acquity C18 column，50mm×2.1mm×1.7μm；进样量2μL；ESI离子源；正离子模式；毛细管电压2.7kV，锥孔电压20V，碰撞能量12V；源温度120℃，去溶剂温度300℃；去溶剂气体流速700L/h，锥孔气体流速50L/h，碰撞气体流速0.15mL/min；c、根据检测结果，蜀黍苷母离子为m/z 329，特征子离子为m/z 180及m/z  132，建立LC–MS/MS–MRM方法，选择m/z 329‑180及m/z 329‑132作为定性离子对，m/z 329‑132作为定量离子对；（2）LC–MS/MS–MRM方法对白酒酿酒原料高粱中的蜀黍苷定性检测：取5g磨碎之后的高粱放置于烧杯中，加入20mL甲醇，超声波萃取30min后过夜保存，次日取萃取液置于50mL离心管12000rpm离心30min取上清滤液，加入体积比1:1的超纯水，使用旋蒸仪蒸发去除20mL甲醇后取1mL待进样检测；（3）制作蜀黍苷定量标准曲线对白酒酿酒原料高粱中的蜀黍苷进行准确定量：d、标准曲线制作：将20mg/L蜀黍苷标准使用液梯度稀释成一系列蜀黍苷标准使用液，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线；e、白酒酿酒原料高粱预处理：取5g磨碎后的高粱于烧杯中，加入20mL甲醇，超声波萃取30min后过夜，次日将萃取液置于50mL离心管12000rpm离心30min，取上清滤液后加入体积比1:1的超纯水，使用旋蒸仪蒸发去除20mL甲醇后取1mL待进样；f、白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的定量分析：使用LC–MS/MS–MRM方法检测样品，使用标准曲线进行定量。