[发明专利]一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，具体涉及一种利用高效液相色谱–电喷雾串联质谱法（LC–MS/MS–MRM）快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，属于白酒分析检测技术领域。

背景技术

中国白酒作为世界八大蒸馏酒（白兰地Brandy、威士忌Whisky、伏特加Vodka、金酒Gin、朗姆酒Rum、龙舌兰酒Tequila、日本清酒Sake、中国白酒Spirit）之一，乙醇含量比伏特加，威士忌，白兰地高（通常乙醇体积40%-55%）。中国白酒用谷物生产，如高粱，或小麦，大麦，玉米，大米与高粱的混合物，通过混合微生物固态发酵，发酵后用中国传统甑桶蒸馏而成，是一个复杂开放的体系，这增加了研究白酒中结合态氰化物（蜀黍苷）的难度。针对白酒当中蜀黍苷的研究，目前多集中在检测方法上，而对其合成与调控机制的研究仍不足。白酒有多种香型，目前主要有浓香、酱香、清香、米香、凤香、药香、豉香、芝麻香、兼香、特型和老白干11种香型。

随着人们对食品安全的重视度增加，各酒企业越来越关注白酒中的安全指标，所以对蜀黍苷定量显得尤为重要。

目前，国内关于白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的研究很少，对蜀黍苷成分的检测方法，主要有：

1、液相色谱法（HPLC–DAD）和高效液相色谱法（UPLC–PDAD）：高效和超高液相色谱适合分析难气化、不易挥发的物质，如酒中的有机酸、氨基酸、生物胺等物质，所以液相色谱多用于检测白酒中一些安全指标物质。

2、气相色谱-质谱联用法（GC–MS）：目前白酒分析多使用气相色谱结合质谱，气相色谱分析的物质大多是挥发性组分。气相色谱主要用于物质的分离，通过气相色谱-质谱联用技术，对白酒中的挥发成分进行定性定量分析，从而对白酒物质成分有较全面的了解。

3、高温酸解法或酶法间接检测：高温酸解法是在酸性环境下加热使待测样品水解之后对水解产物进行检测进而对目标物间接检测的方法。酶法是在最适条件下对目标物进行水解反应之后对水解产物进行检测的方法，也是间接检测目标物的方法。

本发明所用高效液相色谱–电喷雾串联质谱法（LC–MS/MS–MRM）只需对白酒酿酒原料高粱中的蜀黍苷进行简单的提取预处理就可快速准确的进行定量，由于蜀黍苷很可能是形成蒸馏酒中不利物质的重要前体，且本身具有毒性，为了广大消费者的健康考虑，建立一套快速定量酿酒原料高粱中蜀黍苷的检测方法势在必行。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，具体是利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（LC-MS/MS-MRM）快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法。本发明使用0.1%甲酸-水及乙腈作为流动相对样品中的蜀黍苷进行梯度洗脱分离后串联质谱检测，再通过标准曲线进行定量。

本发明的技术方案，一种快速检测白酒酿酒原料高粱中蜀黍苷的方法，其步骤为：

（1）通过XevoTQ串联四极杆液相质谱仪（WatersXevoTQMS，沃特世科技上海有限公司）检测蜀黍苷标准品来确定其特征离子并建立LC–MS/MS–MRM：

a、用甲醇配制200mg/L的蜀黍苷标准品储备液作为最高浓度，用甲醇将其稀释至20mg/L作为蜀黍苷标准使用液；取1mL蜀黍苷标准使用液用微孔滤膜过滤处理后放入2mL样品瓶待进样检测；

b、使用XevoTQ串联四极杆液相质谱仪来检测蜀黍苷标准溶液，液相条件：流动相A：0.1%甲酸-水；流动相B：乙腈；流速0.3mL/min；洗脱梯度：流动相B4min由5%线性增加至40%，再1min由40%线性增加至100%，持续1min，再1min由100%线性减少至5%；色谱柱：WatersAcquityC18column，50mm×2.1mm×1.7μm；进样量2μL；ESI离子源；正离子模式；毛细管电压2.7kV，锥孔电压20V，碰撞能量12V；源温度120℃，去溶剂温度300℃；去溶剂气体流速700L/h，锥孔气体流速50L/h，碰撞气体流速0.15mL/min；

c、根据检测结果，蜀黍苷母离子为m/z329，特征子离子为m/z180及m/z132，建立LC–MS/MS–MRM方法，选择m/z329-180及m/z329-132作为定性离子对，m/z329-132作为定量离子对；