[发明专利]一种大菱鲆肌肉细胞系的建立方法

摘要

本发明公开了一种大菱鲆肌肉细胞系的构建方法。它以大菱鲆肌肉组织为材料，使用单细胞法启动原代培养。在含有胎牛血清、成纤维生长因子的L15培养基中培养，采用胰蛋白酶消化法传代培养。可使用含有DMSO的冻存培养基冻存。此发明构建的大菱鲆肌肉细胞系已经传35代，生长迅速稳定，可提供大量细胞用于营养、免疫、环境毒性、基因功能分析等研究。

主权项

一种大菱鲆肌肉细胞系的建立方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)原代细胞培养：将大菱鲆幼鱼的背部肌肉用DMEM培养基清洗后进行剪切，将组织块再用添加有抗生素的DMEM培养基进行清洗；将清洗后的组织块用含有胶原酶的DMEM培养基进行消化，消化3‑8min后，离心弃掉上清，使用DMEM培养基进行重悬清洗，离心后弃上清；使用添加有胰蛋白酶的DMEM培养基对组织块再次进行消化，消化后离心，收集上清液；沉淀用完全生长培养终止胰酶消化，清洗后用完全生长培养基重悬沉淀，使用细胞筛过滤，收集过滤液后移入之前收集的上清液中；再次离心获得沉淀；使用完全生长培养基重悬细胞沉淀，种入细胞培养平板中放入无二氧化碳的24℃培养箱中培养；2)细胞传代待细胞长满平板后进行传代，传代8次以后，将完全生长培养基中胎牛血清的含量降低为10％，传代30次后完成细胞系的制备。