[发明专利]HSV-1病毒体外基因敲除系统及其制备方法与应用

摘要

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种HSV-1病毒体外基因敲除系统及其制备方法与应用。本发明中构建了可以进行诱导表达Cre-重组酶和I-Sce Ⅰ内切酶的pREDI质粒，并将pREDI质粒、BAC-HSV-1质粒和含有HSV-1病毒靶基因同源片段的DNA片段同时转化到细菌细胞内，在阿拉伯糖和鼠李糖的诱导下，经过同源重组和筛选标记的切除，获得敲除掉靶基因的BAC-HSV-1，从而实现体外快速敲除HSV-1病毒的特定基因。该系统具有快速高效，操作过程简单，成功率高，安全性高等优点，可用于构建临床基因缺陷活疫苗，也可作为对HSV-1特定靶基因功能研究的工具，因此具有很大的科研及临床应用潜力。

主权项

一种HSV‑1病毒体外基因敲除系统，其特征在于：所述的HSV‑1病毒体外基因敲除系统为含有BAC‑HSV‑1载体和pREDI重组载体的细菌细胞；所述的BAC‑HSV‑1载体为载有HSV‑1病毒全基因组的细菌人工染色体；所述的pREDI重组载体为含有阿拉伯糖诱导位点和鼠李糖诱导位点的载体；所述的阿拉伯糖诱导位点和鼠李糖诱导位点可分别诱导Cre‑recombinase重组酶和重组限制性内切酶I‑SecI的表达；所述的重组限制性内切酶I‑SecI可识别I‑SecI识别位点。