[发明专利]一种测定植物亚低温或亚高温耐受性的方法有效
申请号: | 201510266988.0 | 申请日: | 2015-05-25 |
公开(公告)号: | CN104830947B | 公开(公告)日: | 2017-06-23 |
发明(设计)人: | 江雪飞;乔飞;穆大伟;党选民;丛汉卿;王静 | 申请(专利权)人: | 海南大学 |
主分类号: | C12Q1/02 | 分类号: | C12Q1/02 |
代理公司: | 广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙)44295 | 代理人: | 王洪娟 |
地址: | 570228 *** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | 本发明公开了一种测定植物亚低温或亚高温耐受性的方法,包括以下步骤(1)选取植物幼嫩组织,破碎后,加入酶解液混匀,酶解其细胞壁;(2)将产物洗涤、纯化后获得原生质体悬浮液,并在原生质体悬浮液中加入水解酶以保持细胞壁纤维素的低水平再生;(3)将加入水解酶的原生质体在亚低温或亚高温条件下温浴,温浴结束后,加超纯水以降低溶液渗透势,定时测定原生质体的直径;(4)用获得的原生质体的直径值,计算多个原生质体单位时间、单位渗透势、单位面积细胞膜上水分从细胞外进入细胞内的净速度Lp的平均值,该Lp平均值和所选植物适宜温度下的Lp值差值越大,说明其亚低温或亚高温耐受性越差。该方法具有适用性广、分辨率高的特点。 | ||
搜索关键词: | 一种 测定 植物 低温 高温 耐受 方法 | ||
【主权项】:
一种测定植物亚低温或亚高温耐受性的方法,其特征是包括以下步骤:(1)选取植物幼嫩组织,破碎后,向破碎材料中加入酶解液混匀,在黑暗条件下震荡酶解植物幼嫩组织的细胞壁;(2)酶解后过滤,收集滤液,清洗,离心,弃上清,获得原生质体悬浮液,并在原生质体悬浮液中加入水解酶以保持细胞壁纤维素的低水平再生;(3)将加入水解酶的原生质体在亚低温或亚高温条件下温浴,温浴结束后,加超纯水以降低溶液渗透势,定时测定原生质体的直径;(4)用步骤(3)获得的原生质体的直径值,计算多个原生质体单位时间、单位渗透势、单位面积细胞膜上水分从细胞外进入细胞内的净速度Lp的平均值,该Lp平均值和所选植物适宜温度下的Lp值差值越大,说明其亚低温或亚高温耐受性越差;步骤(1)中所述的酶解液为纤维素酶和离析酶R‑10的甘露醇或蔗糖水溶液,其中纤维素酶的浓度为2~3%w/v,离析酶R‑10的浓度为0.5~1%w/v,甘露醇水溶液或蔗糖水溶液的浓度为0.3~0.5mol/L,酶解液的用量与植物幼嫩组织的用量关系为1~5mL:0.2~2g;或步骤(1)中所述的酶解液为纤维素酶、离析酶R‑10和果胶酶的甘露醇或蔗糖水溶液,其中纤维素酶的浓度为2.5~3%w/v,离析酶R‑10的浓度为0.5~1%w/v,果胶酶的浓度为0.1~0.2%w/v,甘露醇或蔗糖水溶液的浓度为0.3~0.5mol/L,酶解液的用量与植物幼嫩组织的用量关系为1~5mL:0.2~2g;步骤(1)中震荡酶解时的温度为22~28℃,速度为70~100 r/min,酶解时间为100~160 min。
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