[发明专利]一种宝珠梨几丁质酶的纯化方法

摘要

本发明涉及一种宝珠梨几丁质酶的纯化方法，属于生物技术酶制剂技术领域首先将除去梨皮和梨核的梨肉榨汁，榨汁后去除杂质加入固体硫酸铵至饱和度20%~40%，然后放入冰水浴中搅拌，搅拌完成后进行冷冻离心，取离心上清液并向离心上清液中添加硫酸铵粉末至饱和度为80~100%，放入冰水浴中搅、冷冻离心获取沉淀物，将沉淀用Tris‑HCl缓冲液溶解，得到粗酶液；将得到的粗酶液用Tris‑HCl缓冲液透析，然后用同样缓冲体系平衡的QSFF阴离子交换层析柱进行线性洗脱，收集5个柱体积的洗脱液即为宝珠梨几丁质酶纯化产物。本发明特异性高，工艺简单，蛋白不易失活，纯化效果好，回收率高，成本低，具有很好的推广应用价值。

主权项

1.一种宝珠梨几丁质酶的纯化方法，其特征在于具体步骤如下：步骤1、粗酶液的制备：首先将除去梨皮和梨核的梨肉榨汁，榨汁后去除杂质加入固体硫酸铵至饱和度20%~40%，然后放入冰水浴中搅拌0.5~1h，搅拌完成后进行冷冻离心10~20min，取离心上清液并向离心上清液中添加硫酸铵粉末至饱和度为80~100%，放入冰水浴中搅拌0.5~1h、冷冻离心10~20min获取沉淀物，将沉淀用Tris‑HCl缓冲液溶解，得到粗酶液；步骤2、QSFF阴离子交换层析：将步骤1得到的粗酶液用Tris‑HCl缓冲液透析，过QSFF强阴离子交换柱，流速为1.0~2.0mL﹒min‑1，用含0~100mMNaCl的20mMTris‑HCl缓冲溶液线性洗脱，收集5个柱体积的洗脱液即为宝珠梨几丁质酶纯化产物；所述步骤1和步骤2中的Tris‑HCl缓冲液pH为7.4~8.5，步骤1和步骤2中Tris‑HCl缓冲液的加入量分别为5~10mL、10~20个柱体积。