[发明专利]一种宝珠梨几丁质酶的纯化方法有效
| 申请号： | 201510250447.9 | 申请日： | 2015-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN104894086B | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 韩鹏;梁小波;李莉蓉;杨程程 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 650093 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 宝珠 几丁质 纯化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种宝珠梨几丁质酶的纯化方法，其特征在于具体步骤如下：
步骤1、粗酶液的制备：首先将除去梨皮和梨核的梨肉榨汁，榨汁后去除杂质加入固体硫酸铵至饱和度20%~40%，然后放入冰水浴中搅拌0.5~1h，搅拌完成后进行冷冻离心10~20min，取离心上清液并向离心上清液中添加硫酸铵粉末至饱和度为80~100%，放入冰水浴中搅拌0.5~1h、冷冻离心10~20min获取沉淀物，将沉淀用Tris-HCl缓冲液溶解，得到粗酶液；
步骤2、QSFF阴离子交换层析：将步骤1得到的粗酶液用Tris-HCl缓冲液透析，过QSFF强阴离子交换柱，流速为1.0~2.0mL﹒min-1，用含0~100mMNaCl的20mMTris-HCl缓冲溶液线性洗脱，收集5个柱体积的洗脱液即为宝珠梨几丁质酶纯化产物；
所述步骤1和步骤2中的Tris-HCl缓冲液pH为7.4~8.5，步骤1和步骤2中Tris-HCl缓冲液的加入量分别为5~10mL、10~20个柱体积。
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