[发明专利]一种以壳寡糖为佐剂的鸭疫里默氏菌菌影疫苗

摘要

本发明的目的在于提供了一种装载具有干扰素诱导活性的聚肌胞苷酸，并加入壳寡糖作为佐剂的鸭疫里默氏菌菌影疫苗。该方案首先构建温控表达载体，电转化入鸭疫里默氏菌原生质体，筛选阳性克隆后28℃增菌培养，然后42℃诱导裂解基因的表达，待OD₆₀₀不再降低时，加入聚赖氨酸继续作用以充分裂解活菌，然后离心分离菌体。将干燥菌体与6mg/mL的聚肌胞溶液等比例混合，使聚肌胞包埋进入菌影内，然后加入2%壳寡糖水溶液搅拌形成均一的混合物，分装于西林瓶，冷冻干燥，即得到鸭疫里默氏菌新型菌影疫苗。本发明所制备的菌影疫苗经饮水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激发体液免疫，对机体的保护效果与注射免疫无明显差异。

主权项

1.一种制备鸭疫里默氏菌菌影疫苗的方法，其特征在于：利用噬菌体PhiX174的E基因与葡萄球菌核酸酶A基因构建温控双裂解基因pBV‑E‑SN，将其电转化鸭疫里默氏菌原生质体，筛选得到阳性克隆；筛选得到的阳性菌落经28℃扩增培养，然后在42℃升温诱导双裂解基因的表达，最后加入聚赖氨酸继续作用以充分裂解活菌，然后离心分离菌体并进行活菌检测；将无菌检查合格菌影调整浓度，使菌影含量达到5×1010cfμ/mL；离心分离菌体，冷冻干燥；干燥菌体按1:1比例加入到按常规方法配制的浓度为6mg/mL的聚肌胞溶液中，搅拌成菌泥初步溶胀6h，使聚肌胞包埋进入菌影内；将壳寡糖配制成2％的水溶液，将上述经过溶胀的菌泥按2:8的比例加入，搅拌使其形成均一混合物，分装于西林瓶，冷冻干燥，即得到鸭疫里默氏菌菌影壳寡糖佐剂疫苗。