[发明专利]一种基于合成单链DNA文库快速高效组合进化DNA的方法在审
| 申请号： | 201510212925.7 | 申请日： | 2015-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN104789556A | 公开（公告）日： | 2015-07-22 |
| 发明（设计）人： | 康振;陈坚;金鹏;堵国成 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于合成单链DNA文库快速高效组合进化DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明先后或同时构建DNA单链突变体文库和双链突变体文库，将突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对启动子、酶和代谢途径进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，可用于调控序列如启动子、核糖体结合位点等基因的快速定向进化，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 合成 dna 文库 快速 高效 组合 进化 方法 | ||
【主权项】：
一种快速高效组合进化DNA的方法，其特征在于，主要包括制备单链突变体文库、制备双链突变体文库、筛选突变体，单链突变体文库与双链突变体文库分开或同步构建；为构建单链突变体文库，针对亲本基因的各个目标突变区域，分别设计引物，各引物方向相同，并通过向PCR体系中添加DNA连接酶来连接各发生突变的核苷酸片段，得到完整的单链突变体；为构建双链突变体文库，单链突变体的两端需带上额外的锚点序列，便于在双链化时，设计用于特异性扩增单链突变体的引物。
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