[发明专利]控制小麦千粒重的主效基因TaTGW‑7A及其CAPS标记方法

摘要

本发明公开了提供控制小麦千粒重的主效基因TaTGW‑7A。本发明还公开了提供控制小麦千粒重的主效基因TaTGW‑7A的CAPS标记方法。本发明的有益效果在于，利用简化基因组测序技术，鉴定出与小麦粒重紧密关联的候选区域，并克隆了该区域的候选基因，经人工群体和自然群体联合验证，该基因是一种对粒重影响显著的新的主效基因，并开发了功能标记(TaTGW‑7A)。经生物信息学分析，该基因为吲哚‑3‑甘油磷酸合酶(IGPS)，是生长素色氨酸合成途径和非色氨酸合成途径的关键酶，直接影响生长素的合成，从而进一步影响粒重的形成。本发明为小麦高产育种提供了新的基因资源，同时进一步阐明了产量形成的分子机制。

主权项

控制小麦千粒重的主效基因TaTGW‑7A的CAPS标记方法，其特征在于，品种为京411，其序列如SEQ ID NO:1，其CDS区是SEQ ID NO:2；小麦千粒重的主效基因TaTGW‑7A的CAPS标记方法，步骤包括：(1)小麦基因组DNA提取；(2)对基因组DNA用限制性内切酶HaeIII进行酶切，对得到的酶切片段用Klenow Fragment和dATP在37℃下进行3′端加A处理、连接Dual‑index测序接头、PCR扩增、纯化、混样、切胶选取目的片段，PCR扩增引物：F AATGATACGGCGACCACCGAR CAAGCAGAAGACGGCATACG文库质检合格后用IlluminaHiSeqTM2500进行测序；(3)设计引物：TaTGW‑7A基因全长引物：Q29：Q29F：GCAAGCCCGTCAACATGTACTACQ29R：AATTTCTGGACTTATGGGGAGCCQ35：Q35F：TCTACCACGCAGCAAATCGCCQ35R：CTGGACTTATGGGGAGCCTCTQ37：Q37F：GCCCGTCAACATGTACTACTCQ37R：GGTAGAGCTTCTCATAGCTGC拼接引物：29P：29PF：AAGGTTTGGGGAGTAAAGTTTT29PR：AGTCAGAATTGTGCCTAAGTGC31P：31PF：GAGGGGTAGGATGAAGGAAGA31PR：ATTTCTGGACTTATGGGGAGCmRNA序列：SR；SRF：ACCCATCCCTCCATCCGTCGSRR：ATCCGCCCACCTGGTAAAGC酶切引物：MQ：MQF：GCTACATACACGCACCAACCCMQR：GACGAGAAGATAGGCGGACAG；引物Q29、Q35、Q37用于扩增TaTGW‑7A基因全长，PCR产物直接测序；引物29P和31P分别扩增TaTGW‑7A基因上游和下游，PCR产物克隆测序，并拼接基因全长；引物SR用于扩增mRNA，产物克隆测序；引物MQ用于CAPS标记开发，用BsmAI在55℃下酶切2h，产物在2％的琼脂糖凝胶电泳上分离，染色后在紫外光下观察记带。