[发明专利]一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法

摘要

本发明属于濒危野生植物中重要植物材料的快速繁殖方法，特别是涉及野生兰花的组织培养方法。本发明目的是提供一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，该方法包括材料选取与消毒、诱导培养、增殖培养、诱导生根和移栽。其中涉及芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。本发明的培养基配方，增殖系数高、生根率高，植物生长需求时间短，栽培后适应性强，苗木健壮挺拔，长势良好，整齐一致，大大缩短了苗木培养过程，节约了大量成本。为多叶斑叶兰的保护，以及规模化、产业化生产推广应用提供技术支持。

主权项

一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：1）材料选取与消毒：将采集的野生植株用流水洗净植物表面沙土，用手术剪剪去植株上叶片三分之二后置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，并用软毛刷刷洗，清洗干净后，自来水下冲滴15～30 min，双蒸水冲洗2～3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s，加入0.1%升汞处理8～13min，无菌水冲荡3～4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；2） 诱导培养：将经消毒处理后的材料，切成带1‑2个节点、长1‑2cm的茎段平放接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1000～1500lx，培养时间15‑20d；3） 增殖培养：将经步骤2）诱导培养，所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为1.5‑2.5 cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1300～1800lx,，增殖培养时间20‑30d；4） 诱导生根：将经步骤3）增殖培养的带有叶2～3片，株高4～5cm的无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间11h/d，光照强度1500～2000lx，诱导生根时间20‑25d；5） 移栽：当诱导生根培养试管苗生长至高5‑6 cm，根3～5条，叶5片，叶长2～3cm时，将试管苗放在自然光下炼苗4～6天，再打开瓶盖炼苗1‑2天，然后用从培养瓶中取出，洗去附着在根系上的培养基，移入蛭石和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，温度控制在15～35℃，湿度保持在75％～85％，避免阳光直射；上述方法涉及的培养基配制如下：（1）芽诱导培养基：MS+1.5 mg/L^‑1 6‑BA +0.5 mg/L^‑1 KT+0.3mg/L^‑1 NAA+ 1g·L^‑1蛋白胨+20g/L 蔗糖+6.5g/L^‑1 Agar+1.5 g·L^‑1活性炭+30 g·L^‑1 香蕉+50 g·L^‑1土豆；（2）增殖培养基：MS+3.0mg/L^‑1 6‑BA +0.5 mg/L^‑1 KT+ 0.5mg/L^‑1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L ^‑1 Agar +1.5 g·L^‑1活性炭+ 2g·L^‑1蛋白胨+30 g·L^‑1 香蕉+50 g·L^‑1土豆；（3）生根培养基：1/2MS+1.0 mg/L^‑1 IBA+0.1 mg/L^‑1 NAA+1 g·L^‑1花宝2 号+20g/L 蔗糖+6.5g/L^‑1 Agar +1.5 g·L^‑1活性炭。