[发明专利]一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于濒危野生植物中重要植物材料的快速繁殖方法，特别是涉及野生兰花的组织培养方法。

背景技术

多叶斑叶兰（Goodyera foliosa (Lindley) Benth.）属于兰科斑叶兰属，是植物中被列入濒危野生动植物种国际贸易公约的物种之一，属国家二级保护植物，分布：中国的福建、广东、广西、四川、台湾、西藏、云南，以及不丹、印度、日本、朝鲜半岛、缅甸、尼泊尔、越南。为解决现有技术中自然繁衍能力、传播扩散能力不强，自然更新困难、优良种苗稀缺等问题。本发明采用组织培养技术快速繁殖大量优质种苗，有助于解决资源匮乏、缓解野生资源遭受严重破坏的压力，有效地保护有限的野生，为规模化、产业化提供技术支持。有关多叶斑叶兰植株再生及快速繁殖技术未见报道。

发明内容

本发明目的是提供一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，为规模化、产业化提供技术支持。

本发明的方法是以如下方式实现的：

一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，具体步骤如下：

1）材料选取与消毒：将采集的野生植株用流水洗净植物表面沙土，用手术剪剪去植株上叶片三分之二后置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，并用软毛刷刷洗，清洗干净后，自来水下冲滴15～30 min，双蒸水冲洗2～3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s，加入0.1%升汞处理8～13min，无菌水冲荡3～4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；

2） 诱导培养：将经消毒处理后的材料，切成带1-2个节点、长1-2cm的茎段平放接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1000～1500lx，培养时间15-20d；

3） 增殖培养：将经步骤2）诱导培养，所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为1.5-2.5 cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1300～1800lx,，增殖培养时间20-30d；

4） 诱导生根：将经步骤3）增殖培养的带有叶2～3片，株高4～5cm的无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间11h/d，光照强度1500～2000lx，诱导生根时间20-25d；

5） 移栽：当诱导生根培养试管苗生长至高5-6 cm，根3～5条，叶5片，叶长2～3cm时，将试管苗放在自然光下炼苗4～6天，再打开瓶盖炼苗1-2天，然后用从培养瓶中取出，洗去附着在根系上的培养基，移入蛭石和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，温度控制在15～35℃，湿度保持在75％～85％，避免阳光直射。

上述方法涉及的培养基配制如下：

（1）芽诱导培养基：MS+1.5 mg/L^-1  6-BA +0.5 mg/L^-1  KT+0.3mg/L^-1 NAA+ 1g·L^-1蛋白胨+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar+1.5 g·L^-1活性炭+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（2）增殖培养基：MS+3.0mg/L^-1  6-BA  +0.5 mg/L^-1  KT+ 0.5mg/L^-1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L ^-1 Agar +1.5 g·L^-1活性炭+ 2g·L^-1蛋白胨+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（3）生根培养基：1/2MS+1.0 mg/L^-1  IBA+0.1 mg/L^-1  NAA+1 g·L^-1花宝2 号+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar +1.5 g·L^-1活性炭。

本发明的显著优点：

一：通过本发明方法可以最大限度地应用现有资源，通过生物技术手段在短时间内解决稀缺资源的应用需求；

二：有助于解决资源匮乏、缓解野生资源遭受严重破坏的压力，有效地保护有限的野生，为规模化、产业化提供技术支持。

三：有关有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法未见报道。