[发明专利]定向固定化PEGA复合型树酯的制备方法及应用

摘要

本发明公开了定向固定化PEGA复合型树酯的制备方法及应用，以2‑氨基‑6‑氯嘌呤和4‑硝基苄醇为原料，发生Williamson成醚反应，合成4‑硝基‑苄基鸟嘌呤，经叔丁氧羰基保护还原，与苄氧羰基氯保护的γ‑氨基丁酸在乙基二甲基碳二亚胺和1‑羟基苯并三氮唑的存在下，发生偶合反应。经还原、分离纯化，与PEGA反应，脱保护即得苄基鸟嘌呤衍生物修饰的PEGA树酯，与含MGMT标签的一类蛋白质发生烷基转移反应，将以硫醚共价键的形式定向固定在PEGA树酯表面。该方法反应稳定、步骤简单，制备的产物可在固体材料表面形成稳定、均匀、取向统一的蛋白质涂层，用于制备具有特异性识别作用的试剂诊断盒。

主权项

定向固定化PEGA复合型树酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a、将2‑氨基‑6‑氯嘌呤和4‑硝基苄醇加入溶剂中，在一定温度和碱性条件下发生Williamson成醚反应，生成4‑硝基‑苄基鸟嘌呤；所述溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或其中任意组合，反应底物摩尔比为1:1，反应温度为80℃，加热回流时间为0.5～24小时之间；b、将4‑硝基‑苄基鸟嘌呤经叔丁氧羰基保护，在钯碳催化下常压加氢，溶剂为四氢呋喃，在4‑二甲氨基吡啶存在的条件下，加入二碳酸二叔丁酯，搅拌还原生成化合物(3)；钯碳用量为反应原料用量的5％，反应温度为25℃，搅拌时间为5～8小时；c、搅拌还原生成化合物(3)，苄氧羰基氯保护的γ‑氨基丁酸在乙基二甲基碳二亚胺和1‑羟基苯并三氮唑的存在下，发生偶合反应，生成化合物(5)；经苄氧羰基保护的反应条件为：NaOH水溶液，室温反应14小时后可得反应产物(4)，发生偶合反应的条件为：加入乙基二甲基碳二亚胺反应0.5小时之后，加入1‑羟基苯并三氮唑，搅拌反应2小时得反应产物(5)；d、发生偶合反应生成的化合物(5)经钯碳加氢还原、分离纯化后，在二氯乙烷、1‑羟基苯并三唑的存在下，与表面富含羧基的PEGA反应，并在二氯甲烷、三氟乙酸的作用下，其反应的摩尔比为1:1～1.5酸性条件下，脱保护即得苄基鸟嘌呤衍生物修饰的PEGA树酯(8)；e、含O6‑烷基鸟嘌呤‑DNA甲基转移酶标签一类蛋白质与苄基鸟嘌呤修饰的树酯直接混合后，即发生高效的烷基转移反应，将以硫醚共价键的形式定向固定在PEGA树酯表面，所述O6‑烷基鸟嘌呤‑DNA甲基转移酶标签一类蛋白质为ɑ‑型受体、β‑型受体、M‑型受体、N‑型受体、血管紧张素受体AT的任一种。