[发明专利]一种PCR酶联双杂交法检测病原微生物检测方法

摘要

PCR酶联双杂交法检测病原微生物属于临床医学微生物检测技术领域，具体为一种多种微生物同步定性和定量检测方法。本发明是结合应用DNA扩增，DNA杂交，和酶联免疫反应，采用固相表面包被技术，经过特异性保守片段的扩增，扩增产物与捕获探针结合，进一步吸附于固相表面，再经过酶联探针的远端杂交，经过特异性抗体识别,酶和底物的反应，产生可定量的颜色产物。所检测的病原微生物包括，EB病毒，巨细胞和胞病毒，单纯疱疹病毒1和单纯疱疹病毒2。本发明可实现对临床样本多种微生物同时检测，经过一个反应同时筛查四种病毒。具有节省时间和费用，应用灵活，重复性好、稳定性强、灵敏度及特异性高、简单易行的特点，适用于广泛的病原微生物检测；尤其适用于基层医疗机构。

主权项

一种多种微生物同步定性和定量检测试剂盒，其特征在于，其包括亲和素(Avidin)包被聚苯乙烯板、纯化DNA试剂和PCR扩增用引物及探针；所述PCR扩增用引物及探针为：CMV检测引物及探针：PCR上下游扩增引物为SEQ ID NO.1,2所示；捕获探针3’末端是生物素标记，序列为SEQ ID NO.3所示；标记探针3’是地高辛标记，序列为SEQ ID NO.4所示；EBV检测引物及探针：PCR上下游扩增引物为SEQ ID NO.5,6所示；捕获探针3’末端是生物素标记，序列为SEQ ID NO.7所示；标记探针3’是地高辛标记，序列为SEQ ID NO.8所示；HSV‑1检测引物及探针：PCR上下游扩增引物为SEQ ID NO.9,10所示；捕获探针3’末端是生物素标记，序列为SEQ ID NO.11所示；标记探针3’是地高辛标记，序列为SEQ ID NO.12所示；HSV‑2检测引物及探针：PCR上下游扩增引物为SEQ ID NO.13,14所示；捕获探针3’末端是生物素标记，序列为SEQ ID NO.15所示；标记探针3’是地高辛标记，序列为SEQ ID NO.16所示。