[发明专利]一种大鼠血管内皮细胞体外培养方法有效
| 申请号： | 201510103424.5 | 申请日： | 2015-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN104673744B | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 王俊力;陈国华;许慧芳 | 申请（专利权）人： | 武汉市中西医结合医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 天津市宗欣专利商标代理有限公司 12103 | 代理人： | 孙乔乔 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供一种大鼠血管内皮细胞体外培养方法,包括取大鼠主动脉，用无菌PBS液进行冲洗，将其沉浸在含肝素的DMEM/F12培养液中；利用无菌针线将主动脉内膜翻转出来，并在两端打结；将翻转后的主动脉放在胶原酶中消化；在37℃温箱中培育后，将被消化的主动脉放入无血清的DMEM/F12培养液，并将其分割成小块的主动脉薄片；将主动脉薄片进行贴壁培养，主动脉薄片的主动脉内膜部分浸入含肝素和血清的DMEM/F12培养液，每隔48h更换一次培养液；第3‑5天，移除主动脉薄片，之后每天更换培养液，第9天即可获得大量的血管内皮细胞，第14天后可用于细胞传代。 | ||
| 搜索关键词： | 主动脉 大鼠 培养液 细胞体外培养 主动脉内膜 血管内皮 翻转 肝素 血管内皮细胞 浸入 消化 针线 两端打结 贴壁培养 细胞传代 无菌PBS 胶原酶 无血清 血清 放入 可用 温箱 无菌 小块 移除 冲洗 沉浸 分割 培育 | ||
【主权项】：
1.一种大鼠血管内皮细胞体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取大鼠主动脉，用无菌PBS液进行冲洗，然后将其沉浸在含肝素的DMEM/F12培养液中以备用；(2)将系上尼龙线的无菌针线穿过主动脉内腔后将无菌针剪下，利用尼龙线在主动脉一末端打结固定；固定尼龙线未打结的一端，拉扯主动脉外膜将分离的主动脉沿打结端翻转，直到整个主动脉是主动脉内膜朝外主动脉外膜朝内；(3)将翻转后的主动脉放在胶原酶中消化；(4)在37℃温箱中培育后，将被消化的主动脉放入无血清的DMEM/F12培养液，将主动脉两端结点剪去使其成为中空管状样，沿纵向剪开并将其分割成小块的主动脉薄片备用；(5)将主动脉薄片进行贴壁培养，所述主动脉薄片的主动脉内膜部分浸入含肝素和血清的DMEM/F12培养液，每隔48h更换一次培养液；(6)第3-5天，移除主动脉薄片，之后每天更换培养液，所述培养液与步骤(5)相同，第9天即可获得大量的血管内皮细胞，第14天后可用于细胞传代。
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