[发明专利]一种促进人工栽培铁皮石斛生长的方法

摘要

本发明涉及铁皮石斛研究与开发应用，旨在提供一种促进人工栽培铁皮石斛生长的方法。该方法是在Basal培养液中加入铁皮石斛多糖等产物及甘油，配制成野生铁皮石斛附生藻的培养液DCA‑M；从野生铁皮石斛茎上分离附生藻，并经高温干燥环境下进行压力筛选，获得保湿耐旱性能好的附生藻；对附生藻进行培养并喷施于人工栽培的铁皮石斛苗，可起到显著的促生长作用。本发明方法与传统促生长方法相比，具有操作简便、成本低、效果明显、对操作人员的专业技术无特殊要求、应用性强等优点，可为人工栽培铁皮石斛高产、优质生产等提供必要的技术方法。

主权项

1.促进人工栽培铁皮石斛生长的方法，包括以下步骤：(1)将50g野生或人工栽培铁皮石斛新鲜茎段剪成1cm的小段并置于研钵内，加入50ml Basal培养液并充分研碎，将研碎物转入1000ml烧瓶中，加入600ml Basal培养液并用玻璃棒充分搅拌直至块状物散开，置于50℃恒温水浴中保温4h，期间不时搅拌；(2)将(1)中的保温液用100目尼龙筛绢过滤，再用300ml Basal培养液润洗烧瓶及筛绢上的滤渣，将滤液用Basal培养液定容至1000ml，并加入2ml甘油，即配制成野生铁皮石斛附生藻培养液，记为DCA‑M；(3)用浸蘸DCA‑M的棉签轻拭野生新鲜铁皮石斛茎上的藻斑，尔后将棉球放入盛有5ml DCA‑M的50ml烧杯中润洗，重复轻拭‑润洗10次，直至烧杯中的藻液呈淡绿色，并用100目的尼龙筛绢过滤；(4)将滤得的藻液置恒温光照培养箱中培养，温度25℃，光照40μmol·m‑2·s‑1，待藻液在分光光度计波长560nm处的光密度OD560达0.8时，用DCA‑M稀释使OD560至0.1，在上述条件下继续放大培养，如此反复，直至OD560达0.8的藻液达100ml；(5)将上述OD560达0.8的藻液转入高速离心机的离心管中以8000～12000rpm的转速离心10‑15min，小心倾去上清液后即得藻泥；(6)将上述藻泥均匀涂于直径为7cm的玻璃培养皿中，置于温度为40℃、相对湿度RH为20％、光照强度40μmol·m‑2·s‑1的人工光照气候箱中处理12d后，取出并用100ml的DCA‑M润洗后转入250ml的三角瓶中置于温度25℃、光照40μmol·m‑2·s‑1的恒温光照培养箱，过10d后发现变绿，取样于显微镜下观察发现野生铁皮石斛附生藻中的部分藻能恢复生长；(7)待(6)中的藻液OD560达0.8时，用DCA‑M稀释使OD560至0.1继续放大培养，直至OD560达0.8的藻液达1000ml；(8)将(7)中OD560达0.8的藻液用Basal培养液稀释使OD560至0.4后，再培养至OD560达0.8，若藻液量还需扩大，再将藻液用Basal培养液稀释使OD560至0.4后，再培养至OD560达0.8，直至获得生产上需要OD560达0.8的藻液的量；(9)用喷雾器将(8)中培养OD560达0.8的藻液以32L/亩的用量喷施于新栽种的铁皮石斛苗上，过3周再如上用量喷施1次，过6周后即可见栽种铁皮石斛的茎及基质松鳞和碎石上有藻长出，这些藻可起到保湿抗旱，并为铁皮石斛提供部分养分的作用，而能显著促进人工栽培铁皮石斛的生长速度。