[发明专利]一种登革病毒快速分型鉴别检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种登革病毒快速分型鉴别检测的试剂盒，特别是涉及一种利用多重实时荧光快速聚合酶链式反应技术鉴别登革病毒四种血清型即I型、II型、III型、IV型的检测试剂盒。本试剂盒主要包括扩增反应缓冲液、引物探针反应液、扩增反应酶系、阴性质控品、阳性质控品，以及分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。由于本试剂盒通过多种荧光通道分别检测的方式，应用具有快速聚合反应的Taq酶，采用一步法实时荧光快速PCR反应模式，能准确快速检测出样本中是否含有登革病毒核酸并鉴别出登革病毒的四种血清型，可广泛应用于登革热尤其是重症登革热以及混合感染登革病毒的早期鉴别诊断、疫情防控、检验检疫等多个领域。

主权项

一种登革病毒快速分型鉴别检测试剂盒，包括：1)扩增反应缓冲液、引物探针反应液、扩增反应酶系、阴性质控品、阳性质控品、DEPC H₂O和2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中引物探针反应液由登革病毒四种型特异性的正、反向引物，登革病毒四种型特异性的探针组成，其特征在于：登革病毒I型特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑TTGAGATCTCTTTTTTGAAACC‑3’和5’‑TCTAAGATTTCTAGCCATACCC‑3’，登革病毒I型特异性探针的序列是5’‑TCGCTCCATTCTTCTTGAATGAGCC‑3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；该对引物探针可特异性地检测登革病毒I型，对登革病毒II型、III型及IV型无交叉反应；登革病毒II型特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑GACGAGGACCATTAAAACTG‑3’和5’‑CATCTCTTCAATATCCCTGC‑3’，登革病毒II型特异性探针的序列是5’‑CATTCCTTCGTTTCCTAACAATCCCA‑3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1；该对引物探针可特异性地检测登革病毒II型，对登革病毒I型、III型及IV型无交叉反应；登革病毒III型特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑TGTGTGATGACACGGTCACTT‑3’和5’‑CACCAGCAGTCAATGTCTTCA‑3’，登革病毒III型特异性探针的序列是5’‑CAAATGCCCCCACATTACCGAAGTG‑3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团Texas Red和荧光淬灭基团Eclipse；该对引物探针可特异性地检测登革病毒III型，对登革病毒I型、II型及IV型无交叉反应；登革病毒IV型特异性的正向和反向引物的序列分别是5’‑TGAATGTGGTGTTAAAGCTACTGA‑3’和5’‑GCAACCTCACGTCTACCTGG‑3’，登革病毒IV型特异性探针的序列是5’‑CTCGTCTCCGTTCTCCGCTCTGG‑3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团Cy5和荧光淬灭基团Eclipse；该对引物探针可特异性地检测登革病毒IV型，对登革病毒I型、II型及III型无交叉反应。