[发明专利]一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法

摘要

本发明提供一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法，使用分离液对脐血单个核细胞进行二次分离后接种到预包被有纤连蛋白及CD90单克隆抗体的培养瓶中，使用无血清培养体系并模拟间充质干细胞体内低氧生长环境，经4‑5天培养后移去悬浮细胞，继续培养贴壁细胞，待原代细胞融合率达到60%后进行传代培养。本发明提供的脐血间充质干细胞的分离及培养方法，有效解决了脐血间充质干细胞提取及培养过程中遇到的贴壁不牢、培养成功率低、纯度不高等问题，提高了临床应用的安全性。另外，本发明扩展了脐血间充质干细胞的应用范围，挖掘了脐血间充质干细胞的利用价值，开拓了脐血间充质干细胞的临床应用前景。

主权项

一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：步骤1、脐血的采集及运输；步骤2、使用分离液对脐血中的单个核细胞进行提取和收集，并对剩余红细胞组分中的单个核细胞再次分离和提取；步骤3、洗涤两次收集的单个核细胞；步骤4、将非特异性促贴壁蛋白及特异性促贴壁蛋白包被在培养瓶底部；步骤5、使用无血清培养体系混悬洗涤后的单个核细胞，接种到已包被的培养瓶中，在低氧条件下培养；步骤6、待原代细胞融合率达到60%时进行传代培养；步骤7、使用低氧条件继续对传代的脐血间充质干细胞进行培养，待细胞融合率达到80%后进行传代；步骤8、对第三代脐血间充质干细胞进行流式细胞鉴定及细胞诱导分化实验；步骤9、收集脐血间充质干细胞进行冻存；所述非特异性促贴壁蛋白为纤连蛋白，浓度为5μg/mL；所述特异性促贴壁蛋白为CD90单克隆抗体，浓度为100μg/mL；所述低氧条件为氧气10%、二氧化碳5%、氮气85%。