[发明专利]一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法

权利要求书

1.一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：

步骤1、脐血的采集及运输；

步骤2、使用分离液对脐血中的单个核细胞进行提取和收集，并对剩余红细胞组分中的单个核细胞再次分离和提取；

步骤3、洗涤两次收集的单个核细胞；

步骤4、将非特异性促贴壁蛋白及特异性促贴壁蛋白包被在培养瓶底部；

步骤5、使用无血清培养体系混悬洗涤后的单个核细胞，接种到已包被的培养瓶中，在低氧条件下培养；

步骤6、待原代细胞融合率达到60%时进行传代培养；

步骤7、使用低氧条件继续对传代的脐血间充质干细胞进行培养，待细胞融合率达到80%后进行传代；

步骤8、对第三代脐血间充质干细胞进行流式细胞鉴定及细胞诱导分化实验；

步骤9、收集脐血间充质干细胞进行冻存；

所述非特异性促贴壁蛋白为纤连蛋白，浓度为5μg/mL；

所述特异性促贴壁蛋白为CD90单克隆抗体，浓度为100μg/mL；

所述低氧条件为氧气10%、二氧化碳5%、氮气85%。

2.如权利要求1所述的脐血间充质干细胞的分离及培养方法，其特征在于，所述脐血采集时间与制备时间的间隔小于8h，脐血体积大于80mL。

3.如权利要求1所述的脐血间充质干细胞的分离及培养方法，其特征在于，所述原代细胞接种后的首次换液时间为4-5天。

4.如权利要求1所述的脐血间充质干细胞的分离及培养方法，其特征在于，所述无血清培养体系为无血清培养液，并添加5%的无血清添加剂。