[发明专利]利用α-L-鼠李糖苷酶催化柚皮苷合成普鲁宁的方法

摘要

本发明公开了一种利用α-L-鼠李糖苷酶催化柚皮苷合成普鲁宁的方法，首先，将柚皮苷溶解于醋酸-醋酸钠缓冲液中，得到柚皮苷底物溶液，再加入大孔吸附树脂，使柚皮苷吸附并固定于大孔吸附树脂中，制得固定化柚皮苷溶液；其次，固定化柚皮苷在α-L-鼠李糖苷酶催化作用下发生水解反应定向合成普鲁宁；最后，分离纯化水解产物得到普鲁宁样品。本发明解决了现有合成方法生成的产品纯度低、收率低以及难以实现工业化生产等问题。本发明可以高效地实现定向水解柚皮苷分子中的α-L-鼠李糖苷键，为酶法制备高纯度普鲁宁的工业化应用提供了新工艺。

主权项

一种利用α‑L‑鼠李糖苷酶催化固定化柚皮苷合成普鲁宁的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、制备固定化柚皮苷：将柚皮苷溶解于pH 4.0的醋酸‑醋酸钠缓冲液中，得到浓度为2.0 g/L的柚皮苷底物溶液，向所述柚皮苷底物溶液中加入大孔吸附树脂，置于50℃水浴中恒温振荡充分固定，使柚皮苷吸附并固定于大孔吸附树脂中，制得固定化柚皮苷溶液；步骤二、α‑L‑鼠李糖苷酶催化固定化柚皮苷合成普鲁宁：向所述固定化柚皮苷溶液中加入α‑L‑鼠李糖苷酶酶液，使溶液中的α‑L‑鼠李糖苷酶浓度达到12U/mL，置于 60℃恒温振荡水浴中进行酶解反应，振荡速率80 r/min，反应时间300 min，α‑L‑鼠李糖苷酶酶液催化固定化柚皮苷合成普鲁宁，获得含水解产物普鲁宁的转化液，普鲁宁被吸附至大孔吸附树脂中；步骤三、普鲁宁的分离纯化：所述酶解反应结束后，过滤收集大孔吸附树脂并装柱，采用体积比为80:20:4.8的丙酮‑氯仿‑水作为洗脱剂对大孔吸附树脂进行洗脱，同时采用薄层色谱法对洗脱液进行跟踪检测，将只含有普鲁宁的洗脱液进行合并，而后利用旋转蒸发仪在60°C下减压蒸发浓缩，甲醇反复重结晶2次，得普鲁宁样品。