[发明专利]以2-Cys Prx为靶点的抗植物线虫侵染化合物的筛选方法

摘要

一种以2‑Cys型过氧化物还原酶为靶点的抗植物线虫侵染化合物的筛选方法，该方法包括构建含马铃薯腐烂茎线虫2‑Cys Prx基因的重组表达质粒pET41b‑DdPrx；将重组表达质粒转入BL21(DE3)感受态细胞，通过IPTG诱导培养以稳定表达重组Dd‑PRX蛋白；将候选化合物与重组DdPrx蛋白共孵育，根据硫氰酸铁法检测候选化合物是否对重组DdPrx蛋白具有离体抑制活性。本方法具有直接、简便、快速等优点，既可用于手工筛选，又可用于大规模高通量抑制剂的筛选。本方法能用于研发筛选抗植物线虫侵染药物。

主权项

1.重组表达质粒pET41b‑DdPrx在以2‑Cys型过氧化物还原酶为靶点进行抗植物线虫侵染化合物筛选中的应用，抗植物线虫侵染化合物筛选包括如下步骤：a、构建含马铃薯腐烂茎线虫2‑Cys Prx基因的重组表达质粒pET41b‑DdPrx；b、将重组表达质粒转入BL21(DE3)感受态细胞，通过IPTG诱导培养以稳定表达重组DdPrx蛋白；c、将候选化合物与重组DdPrx蛋白共孵育，根据硫氰酸铁法检测候选化合物是否对重组DdPrx蛋白具有离体抑制活性；所述步骤b中IPTG诱导培养条件为：温度18‑37℃，IPTG浓度为0.2‑1.4mmol/L；所述步骤c中的共孵育是指将重组DdPrx蛋白加入含10μmol/L‑40μmol/L候选化合物的反应缓冲液中，在30℃水浴条件下孵育30min，其中，该反应缓冲液为含10mmol/L DTT的1×PBS缓冲液，pH为7.0。