[发明专利]一种水溶性生物杀线虫剂的发酵方法及应用

摘要

本发明公开了一种水溶性生物杀线虫剂的发酵方法及应用。包括 Sr18菌活化培养、200L罐发酵放大、5t罐发酵放大、浓缩水剂的制备、粉剂的制备等步骤。实验的结果表明：本发明所建立的发酵工艺为二级发酵，具有发酵工艺简单易控、发酵周期短、能耗低、活性产物高产等特点；制备的浓缩水剂活性强，无毒副作用、稳定、易于储藏，货架期达两年以上；施用方便、可与水以任意比例混合，还可与其他农药配合使用。发酵得到的生物杀线虫剂，可用在防治南方根结线虫和松材线虫以及防治蔬菜根结线虫病害方面具有特异性效果。

主权项

一种水溶性生物杀线虫剂的发酵方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1） Sr18菌活化培养及孢子悬液的制备：将安瓿管中保藏的菌种接入斜面培养基，26℃静置培养6d‑7d；取活化后的Sr18菌斜面，加入5ml无菌水洗下斜面上的孢子，倒入加有玻璃珠的三角瓶内，振荡1~2分钟，计数；所述斜面培养基指的是PSMA培养基：30%马铃薯浸汁+2%蔗糖+0.2%进口麦芽精+0.2%琼脂粉；（2）200L罐发酵放大：采用50L 发酵罐作为种子罐制备一级种子： 按照2.75×106/L的孢子浓度将步骤（1）制备的孢子悬液接入装有22L培养基的种子罐中，26℃培养24h；以4% (w/w)接种量将一级种子接入装有150L发酵培养基的200L发酵罐中，搅拌转速198~252r/min，罐压0.05MPa，通气量以维持溶氧水平为20%~30%为原则，发酵时间40h；所述的发酵培养基为(w/w)：30%马铃薯浸汁+2%蔗糖+0.2%进口麦芽精；(3)5t罐发酵放大:利用马铃薯脱皮机，对马铃薯进行脱皮,切片机切片，浸汁；采用500L发酵罐制备一级种子：以2.794×106/L孢子浓度将步骤（1）制备的孢子悬液接入装有250L培养基的种子罐中，26℃培养24h,以4%(w/w)接种量将一级种子接入装有3.29t发酵培养基的5t发酵罐中，搅拌转速120r/min，罐压0.03‑0.05MPa，通气量以维持溶氧水平25%‑35%为原则，发酵时间37h‑40h；所述的发酵培养基指的是PS或PSM培养基：去皮马铃薯300g煮汁，蔗糖20g，自来水1000mL，其中PSM添加国产麦芽精2g，pH自然；（4）浓缩水剂的制备：发酵结束后，将菌液加热至70‑80℃，采用板框过滤去除菌体，所得滤液经真空浓缩锅浓缩得8‑10倍重量浓缩水剂；（5）粉剂的制备：利用喷雾塔将部分5t罐所得发酵液制成粉剂：取1.3t发酵滤液，添加过400目筛4%(w/w)玉米粉与菌体一起浓缩后，取出220L喷雾干燥，可直接得到粉剂。