[发明专利]一种提高蒺藜苜蓿抗盐害能力的方法

摘要

本发明为一种提高蒺藜苜蓿抗盐害能力的方法，包括（1）印度梨形孢固体CM培养基的配制；（2）印度梨形孢培养及孢子悬浮液收集；（3）印度梨形孢接种蒺藜苜蓿；（4）蒺藜苜蓿幼苗的移栽和后期的管理。本发明采用印度梨形孢孢子悬浮液对种子预先浸泡，可使其寄生于蒺藜苜蓿种子的表面，促进种子提早萌发并显著提高种子的发芽率（由原来的80.0%提高到95.0%）；能显著地提高蒺藜苜蓿生物产量；利用印度梨形孢在蒺藜苜蓿根部寄生可降低蒺藜苜蓿根际中的钠离子积累，增加蒺藜苜蓿盐胁迫耐受力。

主权项

1.一种提高蒺藜苜蓿抗盐害能力的方法，其特征为包括以下步骤：（1）印度梨形孢固体CM培养基的配制：将20 g 葡萄糖，2 g蛋白胨，1 g 酵母提取物，1 g 水解酪蛋白，50 ml 20×盐溶液和1 ml微量元素，加水溶解至1升，再加15 g琼脂粉，高温高压灭菌，冷却后倒入平板即为固体CM培养基；（2）印度梨形孢培养及孢子悬浮液收集：将活化后的印度梨形孢接种于步骤(1)所述的固体CM培养基中培养，培养条件为23 ℃‑30 ℃，黑暗培养箱避光培养，3周后收集孢子体，用0.05% Tween‑20(v/v)配成浓度为2~10×105个/ml的孢子悬浮液；（3）印度梨形孢接种蒺藜苜蓿：首先进行蒺藜苜蓿种子表面消毒：将蒺藜苜蓿种子浸泡到15%（v/v）次氯酸钠溶液中，15～30 min后，用灭菌水冲洗3～6遍；然后实施以下三种方法之一进行印度梨形孢接种：方法一：将种子浸泡到步骤（2）中得到的印度梨形孢孢子悬浮液中，25 ℃，保持40～50 min； 或者，方法二：将步骤（2）中得到的印度梨形孢孢子悬浮液混合于FM培养基中，然后将经过表面消毒的蒺藜苜蓿种子放到含有步骤（2）中得到的印度梨形孢孢子悬浮液的FM培养基中萌发；或者，方法三：用步骤（2）中得到的印度梨形孢孢子悬浮液对预先萌发的蒺藜苜蓿幼苗根部进行孢子液沾染处理，经印度梨形孢孢子悬浮液沾染后的蒺藜苜蓿幼苗转移到FM 无菌培养基的方形培养皿中进行幼苗培养；（4）蒺藜苜蓿幼苗的移栽和后期的管理：将上一步得到的经印度梨形孢侵染后的种子或幼苗放入光照培养箱，培养条件为24‑26 ℃，16 h光期、8 h暗期，湿度60%‑70%，一周后将幼苗进行移栽，接下来实施常规的水肥管理，使蒺藜苜蓿正常生长。