[发明专利]一种靶向鼠T淋巴细胞CD3和人肿瘤抗原HER2的双特异性抗体制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种双特异性抗体、其制备方法及用途。与此同时，还提供了表达人源HER2蛋白的鼠肿瘤细胞系及上述细胞系的用途。本申请的双特异性抗体能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。本发明的肿瘤细胞体内药效实验是在一个具备完整免疫系统的动物模型中开展的，利用免疫系统细胞对肿瘤进行杀伤，并能有效的反应双特异性抗体介导免疫细胞杀伤肿瘤细胞的药效，为靶向免疫细胞和肿瘤细胞的双特异性抗体药物开发提供一个很好药效评估方法。

主权项

1.一种双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括连接的A部分和B部分；其中，A部分包括识别效应细胞表面触发分子的片段，所述细胞表面触发分子选自小鼠的CD3，A部分为ScFv‑Fc形式，包括抗‑mCD3VH、VL、Fc结构域，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；以及B部分包括识别靶细胞表面标志分子的片段，靶细胞表面标志分子选自HER2/neu，B部分为IgG形式，包括抗‑HER2重链与轻链，其重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；A部分包括效应细胞表面触发分子的抗体片段和人IgG1Fc；B部分包括靶细胞表面标志分子的抗体重链和轻链，所述靶细胞表面标志分子的抗体重链和轻链之间通过二硫键连接，靶细胞表面标志分子的抗体重链和轻链之一与人IgG1Fc共价连接；并且A部分的效应细胞表面触发分子的抗体片段通过二硫键与B部分连接，A部分的人IgG1Fc通过盐桥和隆突‑入‑穴结构与B部分的人IgG1Fc连接；所述的抗‑HER2重链在223位点上的半胱氨酸与抗‑HER2的轻链214位点上的半胱氨酸以二硫键的形式连接，所述抗‑HER2重链在229和232位点上的半胱氨酸与抗‑mCD3ScFv‑Fc的254和257位点上的半胱氨酸分别以二硫键的形式连接，所述抗‑HER2重链在368,399,407位点上与抗‑mCD3ScFv‑Fc的366,392,409位点上形成盐桥连接；所述双特异性抗体的结构如图2所示。