[发明专利]一种可改善细菌灭活疫苗免疫效力的工艺

摘要

本发明涉及一种可改善细菌灭活疫苗免疫效力的工艺，其通过将生产用种子菌菌体经过离心收集、洗涤、机械破碎、制粒等工艺。应用该工艺制备的微粒抗原大大简化了细菌灭活疫苗生产流程，可使细菌灭活疫苗具备同时激活体液免疫和细胞免疫的能力，同时该工艺扩大了疫苗佐剂可选择范围；该工艺的应用可大幅降低菌体抗原使用浓度和缩短生产时间，从而降低疫苗生产成本；该工艺使疫苗制备免于使用甲醛等化学灭活剂，消除了有害化学物质的食品残留等隐患。

主权项

1.一种可改善细菌灭活疫苗免疫效力的工艺，其特征在于依次包括如下步骤：a．取种子菌，然后将种子菌进行发酵培养，发酵培养结束后，离心收集培养基中的菌体，所述离心处理的相对离心力为6000-8000xg、离心时间为10-20min；所述种子菌为嗜水气单胞菌；b．将经过a步骤收集到的菌体重悬于生理盐水中，所述生理盐水的体积为经过a步骤得到的菌体湿重的50～100倍体积，接着进行搅拌使菌体均匀分散在生理盐水中；接着离心收集菌体，所述离心处理的相对离心力为6000-8000xg、离心时间为10-20min；c．将b步骤收集到的菌体重悬于200～500倍体积的生理盐水中，得到菌液，所述菌液中菌体的浓度为1×1010CFU/mL，接着充分搅拌至均匀分散；d．将c步骤获得的菌液加入无菌的低温超高压均质机/低温纳米级微生物破碎机的上样容器中，在2～8℃、300～700bar的压力下进行菌体破碎，重复三次，得到菌体裂解液；接着对菌体裂解液进行无菌检验；无菌检验操作具体为：在超净工作台中，将菌体裂解液划线接种到种子菌适宜生长的培养基中，在种子菌适宜生长的温度下培养12-24h，观察是否有菌落生长，无菌落生长，则无菌检验合格；e．取经过d步骤中进行无菌检验合格的菌体裂解液，在低温超高压均质机/低温纳米级微生物破碎机进行制粒，制粒工艺制得的微粒粒径为20-500nm；制粒工作压力为1000～1200bar、温度为2～8℃，重复三次，得到菌体裂解悬液；f．将经过e步骤得到的菌体裂解悬液用生理盐水或PBS调整为4×109～8×109CFU/mL。