[发明专利]一种快速诊断桑椹缩小型菌核病的方法

摘要

一种快速诊断桑椹缩小型菌核病的方法，通过发现的病原核地杖菌特异性保守DNA序列，获得了特异性SCAR-PCR引物，建立了桑椹缩小型菌核病SCAR-PCR诊断检测方法。该方法的灵敏度高(检测灵敏度为1 pg/μL)，特异性强，使用方便快捷，检测结果准确可靠，可用于桑椹缩小型菌核病的田间诊断和桑果带菌情况检测检验；同时还可用于病害潜伏期(已侵染桑果但未显症的时期)诊断，从而对病害做出早期预报，以及时实施必要的控制措施，安全有效地防治病害的发生和危害，减轻或避免经济损失。根据此方法可研制开发桑椹缩小型菌核病“检测试剂盒”产品，广泛应用于桑葚相关产业的科学研究和生产实践。

主权项

一种快速诊断桑椹缩小型菌核病的方法，其特征在于通过以下步骤实现：(1) 取待测样品，采用CTAB方法从样品中提取总DNA；(2) 利用590bp的核地杖菌特异性保守序列设计并筛选得到核地杖菌的一对特异性SCAR‑PCR引物，引物正向序列SS‑F为5'‑ AGTAAAGAGAACATCAAACTTCG ‑3'，位于特异序列的8 bp‑30 bp；反向序列SS‑R为5'‑ ACTTCCACCGACCA ATCT ‑3'，位于特异序列的 580bp‑596 bp；(3) 进行PCR扩增，扩增体系为：2.5μL 10×PCR Buffer； 2.25μL Mg2+，浓度为25mmol/L； 2.5μL dNTPs，浓度为2.5mmol/L；0.625μL引物SS‑F/SS‑R，浓度为10μmol/L；1μL模板，浓度为10ng/μL；0.2U rTaq酶； ddH2O补足至25μL；反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s； 50℃退火30s；72℃延伸45s，循环35次；72℃补充延伸5min；根据扩增条带诊断桑椹缩小型菌核病。