[发明专利]通过微生物代谢途径的遗传修饰制备延长的2-酮酸和由此生成的C6-C10化合物的方法

摘要

代谢途径的修饰包括遗传上工程化至少一种参与亮氨酸生物合成期间延长2‑酮酸的酶，优选至少异丙基苹果酸脱氢酶或合成酶(大肠杆菌中LeuB或LeuA)，以包括至少这种非天然酶、酶复合体或其组合来将2‑酮丁酸或2‑酮异戊酸转化为C7‑C11 2‑酮酸，其中这种生产比采用纯天然途径效率更高。接着可以将该C7‑C11 2‑酮酸通过天然或经遗传工程化的硫胺素依赖型脱羧酶转化以形成比所转化的C7‑C11 2‑酮酸少一个碳的C6‑C10醛。在一些实施方案中，该C6‑C10醛接着可以通过另外的天然或经遗传工程化的酶转化以形成其它C6‑C10产物，包括醇类、羧酸类和烷烃类。这种遗传工程为商业规模的体内生物合成方法提供了机遇，它可以比非生物方法更有成本效益地生产相同产品。

主权项

一种制备C7‑C11 2‑酮酸的方法，包括让选自2‑酮丁酸和2‑酮异戊酸的底物与(1)天然或经遗传修饰的LeuA酶；(2)经遗传修饰的LeuB′酶，其中所述酶(a)从大肠杆菌获得并具有对应于序列表SEQ ID 1的氨基酸序列；所述酶经修饰，是因为丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸或亮氨酸独立地取代Leu‑96、Val‑198、或其组合；或(b)所述酶具有与序列表SEQ ID 1的所述氨基酸序列至少60％同源的氨基酸序列；所述酶与(a)中一样经修饰；以及(3)天然或经遗传修饰的LeuCD′酶复合体；在所述2‑酮丁酸或2‑酮异戊酸通过一个或多个步骤转化为C7‑C11 2‑酮酸的条件下接触。