[发明专利]通过微生物代谢途径的遗传修饰制备延长的2-酮酸和由此生成的C6-C10化合物的方法

权利要求书

1.一种制备C7-C112-酮酸的方法，包括让选自2-酮丁酸和2-酮异戊酸的底物与

(1)天然或经遗传修饰的LeuA酶；

(2)经遗传修饰的LeuB′酶，其中所述酶

(a)从大肠杆菌获得并具有对应于序列表SEQID1的氨基酸序列；所述酶经修 饰，是因为丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸或亮氨酸独立地取代Leu-96、Val-198、或其组 合；或

(b)所述酶具有与序列表SEQID1的所述氨基酸序列至少60％同源的氨基酸序 列；所述酶与(a)中一样经修饰；以及

(3)天然或经遗传修饰的LeuCD′酶复合体；

在所述2-酮丁酸或2-酮异戊酸通过一个或多个步骤转化为C7-C112-酮酸的条件 下接触。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述氨基酸序列

(1)在Leu-96被甘氨酸取代而被修饰；

(2)在Val-198被丙氨酸取代而被修饰；

(3)在Leu-96被丙氨酸取代和在Val-198被丙氨酸取代而被修饰；或

(4)在Leu-96被甘氨酸取代和在Val-198被丙氨酸取代而被修饰。

3.如权利要求1或2所述的方法，还包括让所述C7-C112-酮酸与硫胺素依赖型脱 羧酶在所述C7-C112-酮酸转化为比所转化的所述C7-C112-酮酸少一个碳原子的 C6-C10醛的条件下接触。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，还包括让所述C6-C10醛和至少一种酶 接触，所述至少一种酶选自

(1)醇脱氢酶，在让所述C6-C10醛转化为相应的C6-C10醇的条件下接触；

(2)醛脱氢酶，在让所述C6-C10醛转化为相应的C6-C10羧酸的条件下接触；

(3)脂肪醛脱羧酶，在让所述C6-C10醛转化为相应的C6-C10烷烃的条件下接触； 以及

(4)它们的组合。

5.一种表达或过表达酶的微生物体，所述酶为

(1)从大肠杆菌获得并具有对应于序列表SEQID1的氨基酸序列；所述酶经修 饰，是因为丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸或亮氨酸独立地取代Leu-96、Val-198、或其组 合；或

(2)具有与序列表SEQID1的所述氨基酸序列至少60％同源的氨基酸序列；所 述酶与(1)中一样经修饰。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述氨基酸序列

(1)在Leu-96被甘氨酸取代而被修饰；

(2)在Val-198被丙氨酸取代而被修饰；

(3)在Leu-96被丙氨酸取代和在Val-198被丙氨酸取代而被修饰；或

(4)在Leu-96被甘氨酸取代和在Val-198被丙氨酸取代而被修饰。