[发明专利]一种多靶点抗肿瘤中药活性组分的筛选方法及应用

摘要

一种用于多靶点抗肿瘤中药天然活性组分的筛选方法，具体为从人乳腺癌MCF-7细胞株中提取出含EGFR、TNFR、Fas的受体富集区，连接在硅胶固定相上，构成分离硅胶柱或色谱柱，实现了多靶点抗肿瘤中药活性组分高效筛选，改变了中药活性组分单一靶点筛选的现状，不仅为高效筛选EGFR、TNFR、FAS抑制剂提供了范例，其设计思路对其他抗肿瘤药物活性组分的筛选提供了借鉴和参考价值，而且也证实了在中药活性组分的筛选中具有广泛的应用空间。本发明公开了其制法。

主权项

一种用于多靶点抗肿瘤中药天然活性组分筛选的分离硅胶柱或色谱柱的制法，其特征是它包括如下步骤：(1)MCF‑7细胞的培养及扩增：用含10％小牛血清(NBS)的DMEM培养基培养和扩增MCF‑7细胞，调整细胞数浓度为1×10⁷～10×10⁷个/ml，备用；(2)多靶点受体富集区的提取：收集(1)的MCF‑7细胞中加入含有去垢剂的裂解液，抽提多靶点受体富集区；再用蔗糖密度梯度离心法将受体富集区分离出来，将含有蔗糖的受体富集区混悬液置4℃，pH7.2‑7.5的80‑120mM Tris‑HCL溶液中，透析20‑26h，将含有多靶点受体富集区的溶液置于‑80℃冰箱备用。(3)多靶点受体修饰的分离硅胶柱或色谱柱的制备取所述的9ml含有多靶点受体富集区的Tris‑HCL溶液加入3‑5g活化处理后的硅胶中，置2‑6℃，恒温振摇20‑26h；22‑28℃静置1‑3h；加入pH 7.2‑7.5的100mMTris‑HCL 15‑25ml，混匀后静置3‑8min；2‑6℃500rpm离心8‑12min，弃去上清，加入PBS，混匀后放置3‑8min；重复三次；得到表面修饰有多靶点受体修饰的硅胶的混悬液，装柱，制得用于多靶点抗肿瘤中药天然活性组分筛选的常压硅胶柱或色谱柱。