[发明专利]一种通过预处理提高粘细菌DNA质量的基因组提取方法

摘要

一种通过预处理提高粘细菌DNA质量的基因组提取方法，根据粘细菌在培养过程中生成大量胞外多糖粘液包裹细菌，使细胞在液体中不易分散这一现象，通过在预处理时向洗涤后的粘细菌中加入非离子型表面活性剂，超声震荡仪振荡，然后加入SDS基因提取缓冲液和蛋白酶k水浴，进一步使表面活性剂在液体中混匀使细胞充分裂解；此方法整体操作快速、简便，所用试剂和实验仪器均属于实验室常用仪器试剂，适合于普通常规的实验操作；适用范围广泛，可适用于所有粘细菌的基因组DNA提取，纯化能力强，得到的DNA可以满足于后续PCR扩增、DNA测序等操作。

主权项

一种通过预处理提高粘细菌DNA质量的基因组提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)预处理：将粘细菌在CNST培养基上于28‑30℃下培养5‑7天，然后将菌体转移至离心管中，向离心管中加入无菌水冲洗菌体后，向菌体中加入非离子型表面活性剂水溶液，振荡使菌体分散均匀；其中，每0.3‑0.5g菌体中加入非离子型表面活性剂水溶液的体积为300‑500μL；2)细胞裂解：向振荡后的离心管中加入提取缓冲液、蛋白酶k溶液，然后于65‑70℃下加热，使非离子表面活性剂分散均匀；其中，每0.3‑0.5g菌体中加入提取缓冲液的体积为500‑1000μL；每0.3‑0.5g菌体中加入蛋白酶k溶液的体积为20‑30μL；3)去除蛋白质：向步骤2)的离心管中加入氯仿与异戊醇的混合液，混合均匀得到乳浊液，进行离心后取上清液；其中，每0.3‑0.5g菌体中加入氯仿与异戊醇的混合液的体积为500‑1000μL；4)DNA沉淀洗涤：向步骤4)的上清液中加入醋酸钠溶液和异丙醇，混合均匀后进行离心，所得沉淀为粗提DNA；将粗提DNA纯化后得到基因组DNA。