[发明专利]改良型腈水合酶

摘要

本发明提供一种改良型腈水合酶。具体地，本发明提供一种催化活性提高了的改良型腈水合酶，并且提供编码该改良型腈水合酶的DNA、包含该DNA的重组载体、包含该重组载体的转化体、从该转化体的培养物中提取的腈水合酶及其制造方法。还提供使用了该培养物或该培养物的处理物的酰胺化合物的制造方法。一种改良型腈水合酶，其特征在于，其为β亚基中包含序列号50(GX₁X₂X₃X₄DX₅X₆R)所示的氨基酸序列的腈水合酶；X₄为选自由半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸所组成的组的氨基酸。

主权项

一种改良型腈水合酶，其选自下述中的至少一种：(a1)一种改良型腈水合酶，其特征在于，其为由序列号4及序列号2的氨基酸组成的腈水合酶，α亚基由序列号4所示的氨基酸序列组成，β亚基由序列号2所示的氨基酸序列从N末端开始数第37位的氨基酸为选自由丙氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸所组成的组的氨基酸序列组成；(a2)一种改良型腈水合酶，其特征在于，α亚基由序列号4所示的氨基酸序列组成，β亚基由序列号2所示的氨基酸序列的从N末端开始数第17位的脯氨酸变为甘氨酸、第57位的丝氨酸变为甲硫氨酸，第107位的酪氨酸变为赖氨酸、114位的赖氨酸变为酪氨酸、167位的天冬酰胺变为丝氨酸，第219位的缬氨酸变为丙氨酸，序列号2的从N末端开始数第37位的亮氨酸被丙氨酸或天冬氨酸置换的氨基酸序列组成；(b1)一种改良型腈水合酶，其特征在于，其为由序列号4及序列号2的氨基酸组成的腈水合酶，α亚基由序列号4所示的氨基酸序列组成，β亚基由序列号4所示的氨基酸序列从N末端开始数第83位的氨基酸为选自由丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸和天冬酰胺组成的组的氨基酸序列组成；(b2)一种改良型腈水合酶，其特征在于，α亚基由序列号4所示的氨基酸序列组成，β亚基由序列号2所示的氨基酸序列的从N末端开始数第17位的脯氨酸变为甘氨酸、第57位的丝氨酸变为甲硫氨酸，第107位的酪氨酸变为赖氨酸、114位的赖氨酸变为酪氨酸、167位的天冬酰胺变为丝氨酸，第219位的缬氨酸变为丙氨酸，序列号4的从N末端开始数第83位的谷氨酰胺被选自由丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和天冬酰胺组成的组的氨基酸置换的氨基酸序列组成；(b3)一种改良型腈水合酶，其特征在于，其为由序列号38所示氨基酸序列及序列号37所示氨基酸序列组成，α亚基由序列号38所示氨基酸序列的从N末端开始数第83位的氨基酸被甲硫氨酸置换的氨基酸序列组成，β亚基由序列号37所示的氨基酸序列组成；(c)一种改良型腈水合酶，其特征在于，其为由序列号4及序列号2的氨基酸组成的腈水合酶，α亚基由序列号4所示的氨基酸序列组成，β亚基由序列号4所示氨基酸序列的从N末端开始数第82位的氨基酸为选自由半胱氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、苏氨酸和酪氨酸组成的组的氨基酸序列组成；(d)一种改良型腈水合酶，其特征在于，其为由序列号4及序列号2的氨基酸组成的腈水合酶，α亚基由序列号4所示的氨基酸序列组成，β亚基由序列号4所示氨基酸序列的从N末端开始数第85位的氨基酸为选自由半胱氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、酪氨酸所组成的组的氨基酸序列组成。